免疫細胞的分離方法-檢驗職稱考點
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1.單個核細胞分離
Ficoll分離液是一種單次密度梯度離心分離法,主要用于分離外周血中單個核細胞(PBMC),包括淋巴細胞和單核細胞。其分布由上到下依次為:稀釋的血漿層、單個核細胞層、粒細胞層和紅細胞層。
2.淋巴細胞的分離
①分離原理:利用單核細胞能主動黏附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性,從單個核細胞懸液中除去單核細胞,從而獲得純淋巴細胞群。
②除去單核細胞分離方法:黏附貼壁法、吸附柱過濾法、磁鐵吸引法(吞噬特性)。
③Percoll分離法:是一種連續(xù)密度梯度離心分離法。Percoll液和PBS等量混合,經(jīng)高速離心后可形成一個連續(xù)密度梯度,不同密度的細胞將懸浮于各自不同的密度區(qū)帶,從而將密度不等的細胞分離純化。
3.T細胞和B細胞的分離
①E花環(huán)沉降法:T細胞有綿羊紅細胞受體(E受體/CD2受體)。
②EA花環(huán)沉降法:B細胞表面有l(wèi)gG Fc受體,能與免疫球蛋白(lgG)的Fc段結(jié)合。
4.T細胞亞群的分離
原則:根據(jù)相應細胞的特性和不同表面標志。
●親和板結(jié)合分離法:各種淋巴細胞亞群具有不同的抗原表位。
●磁性微球分離法
●熒光激活細胞分離儀分離法
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