瑞氏染色法的簡述
瑞氏染色法大家都掌握了嗎?快來跟著小編了解一下吧!
染料組成:
酸性染料伊紅(E-) 鈉鹽 陰離子
堿性染料亞甲藍(lán)(M+) 氯鹽 陽離子
將適量伊紅、亞甲藍(lán)溶解在甲醇中。
甲醇的作用:一是溶解亞甲藍(lán)和伊紅;二是固定細(xì)胞形態(tài)。
2. 染色原理 物理吸附與化學(xué)親和作用
③中性顆?!〕实入姞顟B(tài)與E-和M+結(jié)合→淡紫紅色
④紅細(xì)胞
原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞胞質(zhì)、核仁,染成較濃厚的藍(lán)色;中幼紅細(xì)胞既含酸性物質(zhì),又含堿性物質(zhì),染成紅藍(lán)色或灰紅色;完全成熟紅細(xì)胞,酸性物質(zhì)徹底消失后,染成粉紅色。
3. pH值的影響
細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì),由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液pH而定,在偏酸性環(huán)境中正電荷增多,易與伊紅結(jié)合,紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞染色偏紅,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不染色;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)結(jié)合,所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色,顆粒呈深暗,嗜酸性顆粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性顆粒偏粗,呈紫黑色。
①pH<pI→Pr帶正電荷多→易與E-結(jié)合→染色偏紅
②pH>pI→Pr帶負(fù)電荷多→易與M+結(jié)合→染色偏藍(lán)
磷酸鹽緩沖液(pH6.4~6.8)
保證細(xì)胞受色時(shí)恒定最佳pH條件
4. 注意事項(xiàng)
(1)血涂片干透后固定,否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。
(2)沖洗時(shí)應(yīng)以流水沖洗,不能先倒掉染液,以防染料沉著在血涂片上。沖洗時(shí)間不能過久,以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積,可滴加甲醇,然后立即用流水沖洗。
(3)染色過淡可以復(fù)染,復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液,然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡,也可用甲醇脫色。
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