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什么是熒光酶免疫測定
什么是熒光酶免疫測定,跟著小編來學(xué)習(xí)一下吧!
利用酶標(biāo)抗體(抗原)與待檢抗原(抗體)反應(yīng),借助酶反應(yīng)熒光底物,經(jīng)酶促反應(yīng)生成穩(wěn)定且高效的熒光物質(zhì),通過測定熒光強(qiáng)度確定待檢抗原或抗體的含量。
(一)基本原理:以堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記抗體(或抗原),以固相載體包被抗原(或抗體),堿性磷酸酶分解熒光底物4-甲基傘酮磷酸鹽(4-MUP)形成4-MU,經(jīng)360nm激發(fā)光的照射,發(fā)出450nm的熒光。
(二)方法類型
1.雙抗體夾心法:固相抗體和堿性磷酸酶標(biāo)記抗體與待檢抗原反應(yīng),加入底物4-MUP,熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成正比。
2.雙抗原夾心法:用固相抗原和酶標(biāo)記抗原與待檢抗體反應(yīng),加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光,熒光強(qiáng)度與待檢抗體含量成正比。
3.固相抗原競爭法:待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的酶標(biāo)抗體,加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng),熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。
(三)方法評價
固相熒光酶免疫測定法,避免了血清和其他生物樣品的背景熒光會干擾。
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