生物素-親和素系統(tǒng)的應用是什么呢
生物素-親和素系統(tǒng)的應用是什么呢?快來跟著小編了解一下吧!
一、生物素-親和素系統(tǒng)基本類型及原理
(一)BAB法:也稱為橋聯(lián)親和素-標記生物素法(BRAB),是以游離的親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯(lián)劑,將檢測反應體系中抗原-生物素化抗體復合物與標記生物素(如酶標生物素)連接起來。
(二)ABC法:預先將親和素(或鏈霉親和素)與酶標生物素結合,形成可溶性的親和素(或鏈霉親和素)-生物素-過氧化物酶復合物(ABC或SABC)。當其與檢測反應體系中的生物素化抗體(直接法)或生物素化第二抗體(間接法)相遇時,ABC(或SABC)中未飽和的親和素(或鏈霉親和素)結合部位即可與抗體上的生物素結合,使抗原-抗體反應體系與ABC(或SABC)標記體系連成一體進行檢測。
(三)BA法:BA(或LAB)法是以標記親和素(或鏈霉親和素)直接與免疫復合物中的生物素化抗體連接進行檢測。
二、生物素-親和素系統(tǒng)在酶免疫測定中的應用
(一)將BAS與ELISA偶聯(lián)可提高ELISA的靈敏度:每個親和素可結合4個生物素,可使反應明顯放大;親和素與生物素間極高的親和力,使反應結合更牢固穩(wěn)定,而且特異性高;用小分子生物素代替酶標記抗體,可減少反應中的空間位阻。
(二)生物素-親和素系統(tǒng)可作為均相酶免疫測定中高效的酶活性調變系統(tǒng)。
三、生物素-親和素系統(tǒng)在熒光免疫技術中的應用
通常采用BA法,即用熒光素直接標記親和素(或鏈霉親和素);也可采用游離親和素(或鏈霉親和素)搭橋,兩端分別連接生物素化抗體和熒光素標記的生物素(BAB法)或熒光標記的抗親和素(或鏈霉親和素)抗體的夾心法。
四、生物素-親和素系統(tǒng)在放射免疫測定中的應用
BAS主要與免疫放射分析(IRMA)檢測體系偶聯(lián),用于對終反應的放大(BA法)。
此外,BAS也可用于IRMA反應后B,F(xiàn)成分的分離。該法的優(yōu)點是克服了其他IRMA法需多次離心的麻煩,待測復合物與固相結合更牢固,操作更簡便。
五、生物素-親和素系統(tǒng)在分子生物學中的應用
BAS在分子生物學領域中的應用主要集中在:
1.以生物素標記核酸探針進行的定位檢測
2.用BAS制備的親和吸附劑進行基因的分離純化
3.將免疫測定技術與PCR結合建立免疫-PCR用于抗原的檢測
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