1.在離心管中加入適量淋巴細胞分離液。

2.無菌采集靜脈血若干毫升,注入盛有肝素的無菌小瓶中，（每1ml全血加0.1ml125-250U/ml肝素溶液）,加蓋后立即輕輕搖勻,使血液抗凝。

3.稀釋（外周血：稀釋液=1：2取肝素抗凝血與等量生理鹽水充分混勻）。

4.用刻度吸管沿傾斜的管壁，把稀釋血緩慢疊加于分層液面上，醫(yī)學(xué)/教育網(wǎng)注意保持清楚的界面（Ficoll：稀釋血=1：2）。

5.放入離心機1500r/min離心20min（注：緩慢加速1-4檔個3分鐘）。

6.用吸管插到云霧層，吸取單個核細胞。置入另一離心管中，加入5倍以上體積的稀釋液（生理鹽水），1500rpm×10分鐘離心，洗滌細胞。

7.重復(fù)洗滌一次，1500rpm×10分鐘離心。

8.末次離心后，棄上清，加入含有10%小牛血清的RPMI1640，重懸細胞。

9.計數(shù)細胞后再調(diào)整細胞置所需濃度。

10.取一滴細胞懸液與一滴0.2%臺盼蘭染液混合，于血球計數(shù)板上，計數(shù)四個大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。

11.分離出的淋巴細胞置于培養(yǎng)瓶中二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

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