代謝物酶促終點法測定酶的濃度結(jié)果是什么呢？快來跟著小編了解一下吧！

在代謝物酶促反應中，隨著時間的延續(xù)，待測物濃度逐漸減少，產(chǎn)物逐漸增多，一定時間后待測物全部轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，反應趨于平衡。

測定反應完全后（反應達到平衡時）待測物或產(chǎn)物變化的總量，即終點法，又稱平衡法。

代謝物濃度酶促終點法測定的基本條件是：

①待測物濃度[S]應遠小于其米氏常數(shù)Km，此時任何時刻的反應速度ν=V[S]/Km，呈一級反應動力學；

②反應配方中所用酶量應足夠大，而Km應小，以保證有較快的反應速度完成測定。

（1）一步法

如果待測物與產(chǎn)物在理化性質(zhì)上有便于檢測的差異，如吸收光譜不同則可直接測定待測物或產(chǎn)物本身信號的改變來進行定量分析，這種是最簡單的底物法測定。

（2）酶促偶聯(lián)法

如果酶促反應的底物或產(chǎn)物沒有可直接檢測的成分，則可將反應某一產(chǎn)物偶聯(lián)到另一個酶促反應中，而達到檢測的目的。

一般把第一步反應稱為輔助反應，所用工具酶叫輔助酶，偶聯(lián)的反應稱為指示反應，指示反應所用的工具酶叫指示酶。

偶聯(lián)反應應設(shè)計為非限速反應。

（3）最常用的偶聯(lián)指示系統(tǒng)有兩個

以脫氫酶為指示系統(tǒng)的酶促反應，不管是終點法測定，還是動力學法測定，共同的缺陷是受到內(nèi)源性脫氫酶及其底物如乳酸脫氫酶和乳酸/丙酮酸的干擾。

為了消除乳酸脫氫酶的干擾，在反應設(shè)計時一般采用加入乳酸脫氫酶的抑制劑的方法來解決。

終點法還受到乳糜、黃疸和溶血的影響，測定時需設(shè)定樣品空白。

終點法實驗設(shè)計應考慮的問題

①所用工具酶的特異性。

②酶對待測物的親和力，在保證測定線性的前提下，Km要盡量小。

③酶的用量要足夠大。

④工具酶中的雜酶應低于允許限。

⑤反應平衡點：應創(chuàng)造條件使反應朝正反應方向進行。

⑥試劑中的附加劑（如穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑），不應抑制酶的活性。

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