免疫組織化學應(yīng)用的基本原則：

免疫組織化學（immunohistochemistry）又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術(shù)。

免疫組織化學染色在生物醫(yī)學研究中具有十分廣泛的作用。并且涉及許多研究領(lǐng)域。但是，免疫組織化學技術(shù)也有其局限性，例如，組織細胞內(nèi)的待測物質(zhì)要有抗原性，而且需要有一定濃度方可檢出；檢出的免疫反應(yīng)陽性蛋白不能被確定是細胞新合成的蛋白還是通過細胞間運輸而來的蛋白，因此，在實驗設(shè)計中應(yīng)充分考慮這些特點。如果實驗需要證明已知蛋白為何種細胞合成，需采用分子原位雜交技術(shù)解決。為引導(dǎo)初學者在實驗設(shè)計中合理巧妙地運用免疫組織化學技術(shù)，將其應(yīng)用的基本原則簡述如下：

1.確定細胞類型和形態(tài)。組織細胞內(nèi)有些蛋白具有組織特異性，如膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（gial fibrillary acidic protein，GFAP）只存在于星形膠質(zhì)細胞內(nèi)。神經(jīng)絲蛋白（Neurofilament，NF）只存在于神經(jīng)細胞內(nèi)。通常把這些具有組織特異性的蛋白稱為標記性蛋白（Proteiniliaker）。通過標記性蛋白的特異性抗體可確定細胞種類。有些細胞（如表皮內(nèi)朗格漢斯細胞和黑色素細胞等）在光鏡下不易辨認，通過對胞質(zhì)內(nèi)的特定蛋白實施免疫組化染色，便能清楚顯示此類細胞外形輪廓。這種作用在神經(jīng)科學研究和腫瘤臨床病理中顯得尤為重要。

2.辨認細胞產(chǎn)物的來源。利用某些細胞產(chǎn)物為抗原，制備相應(yīng)的抗體，對組織細胞實施免疫組織化學染色，以確定細胞產(chǎn)物的來源。如內(nèi)分泌細胞產(chǎn)生的各種激素，大多數(shù)可用免疫組化染色技術(shù)辨認，據(jù)此可研究細胞的分泌功能及對內(nèi)分泌腫瘤作功能分類，檢測分泌異位激素的腫瘤等，了解細胞分化程度。

3.確定細胞的分化程度分化程度。不同的同一類細胞多表達不同的標志性蛋白，根據(jù)對這些不同蛋白的鑒定可確定細胞的分化程度。例如，神經(jīng)上皮細胞的標志性蛋白是巢蛋白（nestin），當其分化為放射狀膠質(zhì)細胞時表達波形蛋白（vimentin）。醫(yī)|學教育網(wǎng)整理在神經(jīng)元發(fā)生期分化為成神經(jīng)細胞時則表達Ⅲβ神經(jīng)微管蛋白（TUJl），成神經(jīng)細胞分化為成熟的神經(jīng)元時表達神經(jīng)絲蛋白（neurofilament，NF）。

4.追蹤神經(jīng)纖維束和它的投射區(qū)。用于此目的的免疫組織化學方法常與軸漿運輸示蹤法相結(jié)合來研究神經(jīng)元之間的聯(lián)系。軸漿運輸示蹤法是利用某些物質(zhì)可被神經(jīng)末梢攝取。經(jīng)軸質(zhì)逆行運輸?shù)桨w的特點。用組織化學方法顯示出神經(jīng)元的輪廓。常用示蹤劑有辣根過氧化物酶和熒光金等。例如。為觀察周圍神經(jīng)系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)某核團神經(jīng)纖維投射。先將示蹤劑注射到動物神經(jīng)纖維末梢部位，使動物存活一段時間，在預(yù)期神經(jīng)纖維投射部位取材，先通過組織化學方法使示蹤劑定位，再實施免疫組織化學方法確定其性質(zhì)。

5.在臨床病理中的應(yīng)用。如鑒定病變性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)微小病灶，探討腫瘤起源或分化表型，確定腫瘤分期，指導(dǎo)治療和預(yù)后。輔助疾病診斷和分類，尋找感染病因等。