細(xì)菌感染分子生物學(xué)檢測：

（一）常用的分子生物學(xué)技術(shù)

1.核酸雜交 常用的雜交技術(shù)有：斑點(diǎn)雜交、southern印跡、原位雜交、Northern印跡等。探針的種類有全染色體DNA探針、染色體克隆片段DNA探針、質(zhì)粒DNA探針、rRNA基因探針、寡核苷酸探針等。

2.核酸擴(kuò)增技術(shù) 核酸擴(kuò)增技術(shù)是分子生物學(xué)中最具有重大意義的技術(shù)之一。對核酸進(jìn)行擴(kuò)增的方法很多，如聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction ，PCR）、連接酶鏈反應(yīng)、自保留序列擴(kuò)增及Q-beta擴(kuò)增等。以聚合酶鏈反應(yīng)最為廣泛應(yīng)用。

PCR技術(shù)在細(xì)菌的快速檢測、細(xì)菌的毒素基因檢測、細(xì)菌的耐藥性檢測及感染細(xì)菌的流行病學(xué)調(diào)查中得到日益廣泛的應(yīng)用。

生物芯片是新近發(fā)展的一項(xiàng)對基因、蛋白質(zhì)、細(xì)胞及其他生物組分進(jìn)行大信息量分析的檢測技術(shù)。常用的有基因芯片（gene chips）和蛋白芯片（protein chips）。目前正在研制和評價(jià)中。

（二）鑒定感染細(xì)菌種屬的方法

1.細(xì)菌種屬的鑒定

DNA堿基組成的測定 G+C mol%含量不同的細(xì)菌醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)編輯整理，為不同種細(xì)菌；含量相同的可能為不同種的細(xì)菌。細(xì)菌的G+C mol%相當(dāng)穩(wěn)定，不受培養(yǎng)條件、菌齡和其他外界因素影響。最常用的方法是熱變性法。

DNA-DNA雜交 DNA雜交可得出DNA之間核苷酸順序的互補(bǔ)程度，從而推斷不同細(xì)菌基因組間的同源性。

16S rRNA同源性分析 rRNA-DNA雜交、16S rRNA序列測定、16S-23S rRNA序列測定

此外限制性內(nèi)切酶長度多態(tài)性分析（RFLP）、脈沖場凝膠電泳（PFGE）、隨機(jī)引物擴(kuò)增法（RAPD）等技術(shù)常用于菌株間的差異比較。

2.細(xì)菌種屬特異基因

某些基因?yàn)榧?xì)菌種特有或?qū)俟灿?，通過對這些基因的檢測可以鑒定細(xì)菌的種或?qū)?。如編碼吸附和侵襲上皮細(xì)胞表面蛋白的inv基因：invA、invB、invC、invD、invE等是一組只存在于致病性沙門菌中的獨(dú)特的保守基因序列。鞭毛蛋白dlh基因通常只存在于傷寒沙門菌；IS6110、IS986插入片段為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群所擁有等。

3.細(xì)菌毒力基因

可以測定霍亂弧菌的霍亂毒素基因、產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌的耐熱（ST）和不耐熱腸毒素（LT）以及白喉棒狀桿菌的外毒素基因以示相應(yīng)的細(xì)菌存在。

（三）細(xì)菌耐藥性的分子生物學(xué)檢測

1.β內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥基因

青霉素結(jié)合蛋白（PBP）基因 耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌是由mec A基因介導(dǎo)的耐藥，肺炎鏈球菌對青霉素耐藥是由于PBP基因突變而致。

革蘭陰性菌產(chǎn)生的β內(nèi)酰胺酶 由質(zhì)粒介導(dǎo)的β內(nèi)酰胺酶種類繁多醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)編輯整理，可以用PCR或基因探針的方法檢測和分類，如TEM、SHV、OXA、ROB型等。

2.糖肽類抗生素耐藥基因 腸球菌對糖肽類抗生素的耐藥基因由Van A、Van B、Van C等介導(dǎo)，測定這些基因可以預(yù)測對萬古霉素和壁霉素的耐藥性。

3.大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因 紅霉素甲基酶erm基因、大環(huán)內(nèi)酯類泵出基因mef A、mef E、msr A等基因參與了紅霉素的耐藥。

4.喹喏酮類抗生素耐藥基因 喹喏酮類抗生素的主要耐藥機(jī)制是由于螺旋酶和拓?fù)涿傅耐蛔?，常與gyr和par基因突變有關(guān)。

5.分枝桿菌耐藥基因 對利福平的耐藥與rpoB變異有關(guān)，對異煙肼的耐藥與kat G和inh A有關(guān)。