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免疫原的制備佐劑

2013-08-26 19:36 來源:
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為了促進(jìn)抗體產(chǎn)生,可在注射抗原的同時,加入一種輔助劑,這種輔助劑稱為佐劑。佐劑本身可以有免疫原性,也可不具備免疫原性。常用的有免疫原性的佐劑有百日咳桿菌、革蘭陰性桿菌的內(nèi)毒素和抗酸桿菌(包括結(jié)核分枝桿菌和枯草分枝桿菌)等;非抗原性的佐劑有鋁乳、磷酸鈣、石蠟油、羊毛脂、表面活性劑、藻酸鈣、聚核苷酸、胞壁肽等。應(yīng)用最多的是福氏(Freund)佐劑,是用石蠟油、羊毛脂和卡介苗混合而成。

佐劑的作用機(jī)制極為復(fù)雜。在佐劑-抗原的注射部位,可見到細(xì)胞浸潤,幾天后,局部形成肉芽腫(細(xì)胞免疫反應(yīng))。起初,反應(yīng)部位以肉芽組織為主,以后則見多量巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨細(xì)胞、類上皮細(xì)胞醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。局部淋巴結(jié)和脾中也可見大量漿細(xì)胞,提示佐劑可以直接刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞并使之增生。有許多佐劑如內(nèi)毒素、分枝桿菌、小棒狀桿菌、聚核苷酸、皂素等對細(xì)胞膜有活化作用,它們可增加巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的細(xì)胞通透性,促進(jìn)了對抗原的有效處理。佐劑一般是乳劑或懸液,當(dāng)與水溶液抗原混合后形成一種油包水或水包油的乳狀顆粒,這種顆粒延緩了抗原的吸引,增加了局部刺激作用。

另有報告,佐劑和抗原混在一起注射可以改變抗原的分布。應(yīng)用核素標(biāo)記的合成多肽或沙門氏菌鞭毛抗原與福氏佐劑混合注入大鼠或豚鼠后肢足掌,測定局部引流淋巴結(jié)、脾和血清中的抗原含量,發(fā)現(xiàn)它可明顯地延長抗原從局部吸收的時間。對于低分子量的多肽,這一作用較為短暫,而對于鞭毛抗原,這一作用十分明顯。雖然吸收被延緩,但在淋巴結(jié)和脾中,抗原的含量都明顯高于不用佐劑的動物醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。這提示,抗原與佐劑同時應(yīng)用,可促進(jìn)抗原在淋巴組織中存留。

福氏佐劑分為不完全佐劑(石蠟油+羊毛脂)和完全佐劑(石蠟油+羊毛脂+卡介苗)。佐劑和抗原的比例為1:1.由于佐劑是油劑,加入抗原后要充分混合成乳劑。混合的方法有2種,一為研磨法,二為攪拌混合法。研磨法用一乳缽(玻璃或瑪瑙),先將佐劑加熱傾入,待冷卻后加入卡介苗(2~20mg/ml),再逐滴加入抗原,邊滴邊加速研磨,直至完全變?yōu)槿閯橹?。另一種方法是用兩個5ml注射器,在接針頭處用一尼龍管連通,一個注射器內(nèi)是佐劑,另一注射器內(nèi)為抗原。裝好后來回推注,經(jīng)多次混合逐漸變?yōu)槿閯?。本法?yōu)點(diǎn)是無菌操作,節(jié)省抗原或估劑,用此注射器可直接注射;缺點(diǎn)是不易乳化完全。乳化完全與否的鑒定方法是將一滴乳劑滴入水中,如立即散開,則未乳化好,如不散開漂在水面則為乳化完全。

為了防止感染,有時在佐劑中加入抗生素。但抗生素有免疫抑制作用,如能注意無菌操作,就不必加入。

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