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白細(xì)胞介素-2的檢測(cè)

2014-02-18 16:09 來(lái)源:
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(一)細(xì)胞增殖法

IL-2可刺激某些淋巴細(xì)胞增殖,根據(jù)細(xì)胞增殖情況可反映IL-2的活性,結(jié)果以U/ml表示。目前所用的IL-2反應(yīng)細(xì)胞主要有CTLL、CTB6、F12、CTLL-2等小鼠IL-2依賴細(xì)胞株以及ConA活化的小鼠淋巴母細(xì)胞和小鼠胸腺細(xì)胞。這類細(xì)胞的增殖情況均可通過(guò)顯微鏡下直接計(jì)數(shù)、3H-TdR摻入法以及MTT法加以測(cè)定。

1.依賴性細(xì)胞株增殖法IL-2依賴細(xì)胞株在IL-2存在時(shí)才能生長(zhǎng),而對(duì)PHA、ConA等促有絲分裂原及IL-2以外的其它細(xì)胞因子均無(wú)反應(yīng)。CTLL-2對(duì)IL-2的依賴性最強(qiáng),表現(xiàn)為在單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)3H-TdR的摻入量低,而在IL-2存在時(shí)摻入值高,故為首選的靶細(xì)胞株。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理

2.T淋巴母細(xì)胞增殖法T細(xì)胞經(jīng)植物血凝素激發(fā)轉(zhuǎn)化為T(mén)淋巴母細(xì)胞,并表達(dá)豐富的IL-2受體,在體外IL-2存在時(shí)持續(xù)增殖,并與IL-2含量呈劑量依賴關(guān)系。

3.胸腺細(xì)胞增殖法IL-2可以增另ConA的促有絲分裂原作用而引起T血細(xì)胞大量增殖。將一定數(shù)量的小鼠胸腺細(xì)胞與亞刺激量的ConA和不同稀釋的待檢標(biāo)本共育,在一定時(shí)間后檢測(cè)IL-2增殖情況即能代表IL-2的活性。胸腺細(xì)胞增殖試驗(yàn)是目前檢測(cè)IL-2活性最簡(jiǎn)便的方法。此法缺點(diǎn)是敏感性較差,如待測(cè)標(biāo)本中存留有ConA會(huì)出現(xiàn)較強(qiáng)的非特異性反應(yīng)等。

(二)免疫學(xué)檢測(cè)法

根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的原理,可利用抗IL-2的單克隆或多克隆抗體直接測(cè)定樣品中的IL-2含量,結(jié)果用ng/ml表示。本法在rIL-2生產(chǎn)制備過(guò)程中可用以跟蹤檢測(cè),在rIL-2基因克隆時(shí)亦可對(duì)陽(yáng)性質(zhì)粒進(jìn)行初步篩選。

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