光譜分析法

　　一、紫外—可見分光光度法

　　(一)特點(diǎn)

　　靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml~10-7g/ml;準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2%~5%;儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單，易于普及;應(yīng)用廣泛，許多化合物可以，同時(shí)應(yīng)用計(jì)算分光光度法不經(jīng)分離而直接測(cè)定混合物中各組分的含量。

　　(二)基本原理

　　波長(zhǎng)200～400nm范圍稱為紫外光區(qū)，400～760nm稱為可見光區(qū)。物質(zhì)吸收紫外和可見光區(qū)電磁波而產(chǎn)生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜。 （醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理）

　　Lambert-Beer定律 A=ECL

　　A為吸收度，E為吸收系數(shù)，C為被測(cè)物質(zhì)溶液濃度，L為光路長(zhǎng)度。吸收系數(shù)E是物質(zhì)的物理常數(shù)，隨濃度C單位的不同有不同表示方法。藥品檢驗(yàn)中使用百分吸收系數(shù) ，物理意義是當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%(1g/100ml)，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度。

　　(三)可見-紫外分光光度計(jì)

　　光源-單色器-吸收池-檢測(cè)器-數(shù)據(jù)記錄和處理

　　1.光源：紫外光區(qū)通常采用氫燈或氘燈，可見光區(qū)采用鎢燈。

　　2.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見光區(qū)，石英池適用于紫外、可見光區(qū)，通常僅在紫外光區(qū)使用。

　　(四)紫外吸收光譜與物質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)系

　　紫外—可見吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價(jià)電子躍遷產(chǎn)生的，也稱電子光譜。它與原子光譜的窄吸收帶不同。每種電子能級(jí)的躍遷會(huì)伴隨若干振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷，使分子光譜呈現(xiàn)比原子光譜復(fù)雜得多的寬帶吸收。

　　當(dāng)分子吸收紫外—可見區(qū)的輻射后，產(chǎn)生價(jià)電子躍遷。這種躍遷有三種形式：

　　(1)形成單鍵的σ電子躍遷。

　　(2)形成雙鍵的π電子躍遷。

　　(3)未成鍵的n電子躍遷。

　　(五)吸收度的測(cè)定方法

　　1.對(duì)溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無相互作用，揮發(fā)性小，在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸收要符合要求。

　　2.空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)：將配制溶液用溶劑(空白溶液)裝入?yún)⒈瘸乩?，調(diào)節(jié)儀器，使吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射。反射的影響。

　　3.測(cè)定波長(zhǎng)確證：為提高測(cè)定方法靈敏度，減少測(cè)定誤差，吸收度一般在λmax處測(cè)定。

　　4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內(nèi)。

　　5.儀器的狹縫寬度：以減少狹縫寬度時(shí)，供試品溶液吸收度不再增加為準(zhǔn)。