血液標(biāo)本的采集是分析前質(zhì)量控制的重在環(huán)節(jié),可分為毛細(xì)血管采血法和靜脈采血法。需要血量較少的檢驗,如手工法或半自動血細(xì)胞分析儀血細(xì)胞計數(shù),常用毛細(xì)管采血法。需血量較多檢驗,如紅細(xì)胞比積、臨床生化檢驗、全自動血細(xì)胞分析血細(xì)胞計數(shù)一般用靜脈采血法。特別是全自動血細(xì)胞分析儀,無論儀器進(jìn)樣品多少,為防止血樣中小凝塊的形成,保證儀器進(jìn)樣時標(biāo)本能充分混勻,原則上均應(yīng)使用靜脈血。毛細(xì)血管血和靜脈血之間,無論細(xì)胞成分或化學(xué)組成,都存在程度不同的差異。在判斷和比較所得結(jié)果時必須予以考慮。
某些生理因素,如吸煙、進(jìn)食、運動和情緒激支等,均可影響血液成分。甚至一日之間,白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞絕對值、淋巴細(xì)胞各亞群的比例等參數(shù)均有一定的波動醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理。服用某些藥物可能明顯干擾實驗,得出假象結(jié)果。因此采血時,應(yīng)詢問濁否服用過明顯干擾試驗的藥物(如阿司匹林對血小板聚集的抑制作用)關(guān)盡可能在一定時間在避免干擾因素條件下進(jìn)行,以便于比較和動態(tài)分析。
一、毛細(xì)血管采血法
成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛較輕,操作方便,適用于肥復(fù)采集,特別是手指皮膚粗厚者,但耳垂外周血循環(huán)較差,血細(xì)胞容易停滯,受氣溫影響較大,檢查結(jié)果不夠恒定。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白和紅細(xì)胞比積結(jié)果均比靜脈血高,特別是冬季小波動幅度更大。手指采血操作方便??色@較多血量。嬰幼兒手指太小可用拇指或足跟采血。嚴(yán)重燒傷患者,可選擇皮膚完整處采血,采血器以用帶帶三棱針或?qū)S玫?ldquo;采血針”為好,特別是后者有利于采血技術(shù)的質(zhì)量控制,為了避免交叉應(yīng)嚴(yán)格實行一人一針制。應(yīng)注意穿刺的深度的適當(dāng),切忌用力擠壓,以免混入組織液,影響檢驗結(jié)果。
二、靜脈采血法
幾位于體表的淺靜脈均可作為采血部位,通常采用肘部靜脈,肘部靜脈不明顯時,可用手背靜脈或內(nèi)踝靜脈。幼兒可于頸外靜脈采血。根據(jù)采血量可選用不同型號注射器配血相應(yīng)的針頭。某些特殊的檢查,比臺血小板的激活,要使用塑料注射器和硅化處理后的試管或塑料閉幕式管。采血前應(yīng)向病人作適當(dāng)解釋,以消除不必要的疑慮和恐懼。如遇個別病人采血后發(fā)生暈厥,可讓其平臥,通常休息片刻即可恢復(fù)。必要時可嗅芳香氨酊,針刺或指掐人中,合谷等穴位。止血帶壓迫時間不難過長,歸好不超過半分鐘,以避免瘀血和血液濃縮,有試驗證明,壓迫時間過長,可引起纖溶活性增強(qiáng),血小板釋放及甘些因子活性增強(qiáng),影響某些實驗結(jié)果。注射器和容器必須干燥,抽血時避免產(chǎn)生大量泡沫,向血后應(yīng)先拔針頭,然后將血液徐徐注入標(biāo)本容器。否則可能導(dǎo)致溶血。溶血標(biāo)本不僅紅細(xì)胞半數(shù),紅細(xì)胞比積降低,血漿清化學(xué)組成也會產(chǎn)生變化,影響鉀、鎂、轉(zhuǎn)氨酶等多項指標(biāo)的測定。有些試驗需用具有嚴(yán)密寒緊的,潔凈的橡膠或塑料寒子的玻璃或塑料管作采血及儲存器。目前國外已經(jīng)普及(國內(nèi)已開始生產(chǎn))的封閉式真空采血器,既有利于標(biāo)本的收集運送和保存,又便于防止血液交叉感染,已開始在國內(nèi)推廣使用。
血液標(biāo)本的保存條件非常重要,不適當(dāng)保存直接影響實驗結(jié)果。文獻(xiàn)報導(dǎo),既便將血漿放在4.C冰箱內(nèi)保存,24小時后的因子活性也僅為采血后即刻實驗結(jié)果的5%(減少95%),而供血液分析儀進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的血液只能在室溫下保存,低溫保存可使血小板計數(shù)結(jié)果減低。因此,應(yīng)根據(jù)實驗項止確定最佳的保存條件。
三、抗凝劑
抗凝劑種類很多,性質(zhì)各異,必須根據(jù)檢驗止的適當(dāng)選擇,才能獲得預(yù)期的結(jié)果?,F(xiàn)將實驗常用抗凝劑及其使用方法簡述如下:
1、乙二胺四乙酸:鹽 EDTA有二鈉、二鉀和三鉀鹽。均可與鈣離子結(jié)全成螯合物,從而阻止血液凝固。
EDTA鹽經(jīng)1000C烘干,抗凝作用不變,通常配成15g/L水溶液,每瓶0.4ml,干燥后可抗凝5ml血液。EDTA鹽對紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小,根據(jù)國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)公委員會1993年文件建議,血細(xì)胞計數(shù)用EDTA二鉀作抗凝劑,用量為EDTA-K2.2H2O1.5-2.2Mg (4.45±0.85μmol)/ml血液。EDTA-NA與EDTA-K2對血細(xì)胞計數(shù)影響均較小,但二鈉溶解度明顯低于二鉀,有時影響抗凝效果,其他抗凝劑不適合于血細(xì)胞計數(shù)。2.枸椽酸鈉:枸椽酸鹽可與血中鈣離子形成可溶性螯合物,從而阻止血液凝固。
枸椽酸鈉有多種晶體。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l濃度),與血液按1:9或1:4比例使用。枸椽鈉對凝血V因子有較好的保護(hù)作用,使其活性減低緩,故常用于凝血象的檢查,也用于紅細(xì)胞沉降率的測定。因毒性小,是輸積壓保養(yǎng)中的成分之一。
由于枸椽酸鈉溶液是按體積肥比例加入血液內(nèi)達(dá)到抗凝目的的,而抗凝劑主要是作用于積壓漿成分,通常所謂的1:9比例抗凝的概念是提1份體積的抗凝劑作用9份紅細(xì)胞比積正常血液內(nèi)的血漿成分而言。所以臺果對貧血或紅細(xì)胞增多癥患者的血液仍按1:9的比例加入抗凝劑時,就會發(fā)生抗凝劑足或相對過多,這將明顯地影響凝象檢查結(jié)果。為了避免這種現(xiàn)象,有文獻(xiàn)報道應(yīng)根據(jù)抗凝劑用量(ml)=0.00185×血量×(100-病人紅細(xì)胞比積%)這一公式,來計算抗凝劑的用量。
3.草酸鈉:草酸鹽可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀,從而阻止血液凝固。
草酸鈉通常用0.1mol/L濃度,與血液按1:9比例使用,過去主要用于凝務(wù)象檢查。實踐發(fā)現(xiàn)草酸鹽對凝備V因子保護(hù)功能差,影響凝血酶原時間測定效果;另外由于草酸鹽與鈣結(jié)合形成的是沉淀物,影響自動凝血儀的使用,因此,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為凝積壓象檢查選用枸椽酸鈉為抗凝劑更為適宜。
4.肝素:肝素廣泛在于肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細(xì)胞和暑堿性粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團(tuán)的粘多糖,是分散物質(zhì),平均分子量為15000(2000-40000)。肝素可加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)滅活絲氨酸蛋白酶,從而具有阻止凝血酶形成,對抗凝血酶和阻止血小板聚集等多種作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5Iu .盡管肝素可以保持紅細(xì)胞的自然形態(tài),但由于其??梢鸢准?xì)胞聚集關(guān)使用涂片在羅氏染色時產(chǎn)生藍(lán)色背景,因此肝素抗凝血不適全血液學(xué)一般檢查。肝素是紅細(xì)胞透滲脆性試驗理想的抗凝劑。