三、vWF 的生物合成

　　vWF 在內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞中合成，合成過(guò)程在2種細(xì)胞中相似。最早翻譯產(chǎn)物為2813個(gè)氨基酸的前-原- vWF 單體，信號(hào)肽在粗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)裂解，形成原- vWF （pro-vWF）。N-糖苷鍵位點(diǎn)開(kāi)始糖基化，在一些位點(diǎn)上連接高甘露糖鏈，這是原- vWF 單體二聚體化所必需的，原- vWF通過(guò)C-端半胱氨酸殘基形成肽鏈間的二硫鍵產(chǎn)生二聚體的原- vWF .由于單體不能形成多聚體也不能分泌，故二聚體化極重要。原- vWF 二聚體為以后過(guò)程的基本單位。原- vWF 二聚體形成后轉(zhuǎn)移至高爾基體。在高爾基體內(nèi)，高甘露糖側(cè)鏈繼續(xù)修飾形成復(fù)雜的糖鏈，O-糖苷鍵位點(diǎn)連接糖側(cè)鏈并硫化。糖鏈修飾的結(jié)果使原- vWF 亞單位分子量增加到近310KD，但這些復(fù)雜的糖側(cè)鏈對(duì)以后多聚化和分泌過(guò)程并非必要。在高爾基體內(nèi)原- vWF 二聚體通過(guò)N-端的半胱氨酸形成二硫鍵產(chǎn)生原- vWF 多聚體，貯存在分泌器和Weibl-Palade體內(nèi)，在這里裂解vWF AgⅡ成為成熟vWF ，vWF AgⅡ裂解過(guò)程中有特異的枯草菌蛋白酶樣的蛋白酶參與。在分泌器中部分原- vWF 多聚體的vWF AgⅡ裂解，聚合的多聚體較小。在Weibl-Palade器中，可能有一定量的原-VWF未被裂解，但通常分泌前裂解vWF AgⅡ聚合成大分子量多聚體。無(wú)論在成熟vWF 中存在與否，vWF AgⅡ在vWF 多聚化過(guò)程中起著重要的作用。在高爾基體內(nèi)后期，二硫鍵異構(gòu)酶通過(guò)形成鏈間二硫鍵對(duì)多聚體形成起著重要作用。醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理 

　　培養(yǎng)的人內(nèi)皮細(xì)胞vWF 有兩條分泌途徑。一條為連續(xù)合成依賴的過(guò)程，稱為體質(zhì)性釋放（constitutive release），另一條為刺激誘導(dǎo)的貯存部位Weibel-Palade體分泌以前合成的vWF 稱為調(diào)節(jié)途徑或刺激釋放途徑，體外內(nèi)皮細(xì)胞新合成vWF 在連續(xù)不斷地釋放，體質(zhì)性途徑釋放的為二聚體和小多聚體，含有vWF AgⅡ的原- vWF 亞單位或成熟亞單位。約5%新合成vWF 進(jìn)入Weibel-Palade體，但貯存并通過(guò)刺激誘導(dǎo)途徑釋放的是由成熟亞單位構(gòu)成的大多聚體，在vWF 功能中起更大的作用。凝血酶、組織胺、纖維蛋白、補(bǔ)體C5b-9氧基均可刺激誘導(dǎo)分泌vWF .血小板中vWF 由巨核細(xì)胞合成，合成過(guò)程與內(nèi)皮細(xì)胞幾乎相同，差別僅在巨核細(xì)胞內(nèi)二聚體之間二硫鍵形成更廣泛，形成比血漿vWF 更大的多聚體。血小板vWF 亞單位無(wú)蛋白水解作用，而每個(gè)血漿vWF亞單位可見(jiàn)到標(biāo)志著蛋白水解作用的多條衛(wèi)星帶。血小板vWF 貯存在α-顆粒，兩種途徑在血小板表面表達(dá)：主要途徑是誘導(dǎo)劑使α-顆粒釋放vWF 并首先與GPⅡ/Ⅲ連接；另一途徑是血小板形狀改變導(dǎo)致血小板vWF 表面表達(dá)，與纖維蛋白連接。

　　四、vWF 的功能

　　vWF 在血小板粘附于內(nèi)皮表面，血小板伸展和血小板之間的聚集過(guò)程中起著重要作用，vWF 和第Ⅷ因子連結(jié)可以穩(wěn)定和保護(hù)第Ⅷ因子，并將第Ⅷ因子帶至需要其參與促進(jìn)凝血過(guò)程的部位。醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

　　在中至高切變力下血小板粘附于內(nèi)皮下層需要vWF 參與。血漿vWF 缺乏或質(zhì)的異常使血小板很少能粘附于內(nèi)皮下層。血小板伸展差，血小板聚集的數(shù)量和大?。ㄑǎ┚鶞p少。vWF 與血小板受體GPIb 和GPⅡb/Ⅲa的結(jié)合起著重要的作用。vWF 與GPIb 連接使血小板粘附于內(nèi)皮下層。vWF 與GPⅡb/Ⅲa的連接需要血小板激活，其它與GPⅡb/Ⅲa結(jié)合的粘蛋白如纖維蛋白原和纖維結(jié)合蛋白可競(jìng)爭(zhēng)性抑制vWF和GPⅡb/Ⅲa的結(jié)合。盡管血漿vWF水平低于這些競(jìng)爭(zhēng)性血漿蛋白質(zhì)，但在局部表面vWF和GPⅡb/Ⅲa的連接仍具重要性。血小板vWF在凝血酶、ADP、膠原和其它誘導(dǎo)劑作用下釋放并首先與GPⅡb/Ⅲa連結(jié)，與血漿vWF連接GPⅡb/Ⅲa不同，鈣螯合劑和抗GPⅡb/Ⅲa的單抗不能完全抑制這種表達(dá)。阿斯匹林部分抑制ADP誘導(dǎo)的表達(dá)，但不能抑制凝血酶誘導(dǎo)的表達(dá)。持續(xù)的高切變力可以誘導(dǎo)血小板聚集，在小動(dòng)脈或部分阻塞的動(dòng)脈中可能會(huì)達(dá)到這種條件。高切變力下血小板粘附和血栓形成不依賴于纖維蛋白原，而主要與vWF連接GPIb 和GPⅡb/Ⅲa有關(guān)。這種聚集不需要誘導(dǎo)劑，但依賴于存在高分子量vWF并與GPIb 和GPⅡb/Ⅲa結(jié)合。內(nèi)皮細(xì)胞和血小板來(lái)源的高分子量vWF多聚體比血漿中的作用更強(qiáng)，腎上腺素和肝素加強(qiáng)高切變力誘導(dǎo)的血小板聚集。因此vWF在血栓形成中可能起著重要的作用。

　　vWF的作用與其功能區(qū)的關(guān)系見(jiàn)表1.vWF與GPIb 的結(jié)合位點(diǎn)位于A1區(qū)509-695氨基酸殘基。瑞斯托霉素誘導(dǎo)的vWF與GPIb 的連接，殘基474-488和694-708起重要作用，可能為瑞斯托霉素的補(bǔ)充位點(diǎn)。Botrocetin（一種蝰蛇毒）也可調(diào)節(jié)vWF與 GPIb的連接。其與vWF的連接位點(diǎn)在539-643殘基，而在514-542的氨基酸在Botrocetin-vWF-GPIb 間的反應(yīng)中起重要作用。膠原與vWF的連接位點(diǎn)在542-622殘基。肝素的連接位點(diǎn)在565-578.vWF與硫脂類(lèi)的結(jié)合位點(diǎn)為569-584和628-645.這些作用位點(diǎn)均在A1區(qū)內(nèi)。膠原的另一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)在A3區(qū)內(nèi)948-998，可能是vWF結(jié)合膠原的主要位點(diǎn)。與肝素結(jié)合的另一個(gè)位點(diǎn)在1-272殘基 ，該位點(diǎn)親和力低。vWF與GPⅡb/Ⅲa的結(jié)合位點(diǎn)在1744-1747殘基，這是一個(gè)由精氨酸-甘氨酸-門(mén)冬氨酸組成的四肽序列（RGDS），在其他粘蛋白如纖維蛋白原和纖維結(jié)合蛋白存在同樣的序列。具有四肽序列的多肽和纖維蛋白原γ-鏈?zhǔn)亩螌?duì)vWF與GPⅡb/Ⅲa的連接有競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。四肽序列在vWFAgⅡ中也存在，但作用不明。第Ⅷ因子與vWF的結(jié)合雖然是氫鍵，但很牢固。vWF的結(jié)合位點(diǎn)在1-272殘基區(qū)段內(nèi)，第Ⅷ因子的結(jié)合位點(diǎn)在輕鏈N端的酸性區(qū)，殘基1669-1689內(nèi)。游離第Ⅷ因子易被蛋白酶滅活，生存期很短。vWF與第Ⅷ因子結(jié)合可以防止第Ⅷ因子的快速滅活。他們結(jié)合的比例為1：1.vWF與內(nèi)皮下層和血小板的結(jié)合以及損傷內(nèi)皮細(xì)胞均釋放vWF，使局部第Ⅷ因子濃度增加并接近其他凝血因子，從而加強(qiáng)了血栓形成。

　　vWF的糖鏈與vWF的功能有關(guān)。去掉vWF末端的唾液酸后，在無(wú)誘導(dǎo)劑的情況下，vWF可與GPIb和GPⅡb/Ⅲa結(jié)合使血小板聚集，表明唾液酸有防止vWF自發(fā)性地參與血小板聚集的作用。糖鏈在穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，保持可溶性，防止被纖溶酶，胰蛋白酶及糜蛋白酶等的蛋白水解作用降解中起重要作用。在瑞斯托霉素存在時(shí)，O-連接的糖鏈在vWF-GPIb之間的反應(yīng)中可能起重要作用。