
摘 要:目的建立一種快速、特異、準確定量的單純皰疹病毒2型(HSV-2)檢測方法。
方法 構建重組質粒pMD18-T-gG作為標準品。以HSV-2的gC基因區(qū)為靶基因區(qū),設計合成引物和探針,采用TaqMan MGB技術對HSV-2進行實時定量PGR檢測,優(yōu)化反應體系,并進行方法學評價。
結果 成功構建重組質粒pMD18-T-gG.建立利用TaqMan MGB技術的real-time PGR方法,其重復性較好[批內CV(變異系數(shù))值為2.29%,批間CV值為4.76%]、特異性較好(對HSV-1、Veto細胞、巨細胞病毒、弓形蟲等無特異性擴增)、線性范圍好(4.75×101~4.75×106 copies/μl,r=0.998),靈敏度達到47.5 copies/μl;與ELISA法進行比較,認為前者的靈敏度更高、檢測時間更短。
結論 建立的TaqMan MGB PGR方法能夠快速準確、特異、靈敏地對HSV-2進行定量分析,可為臨床診斷提供幫助。