臨床微生物學實驗室接到標本后應(yīng)立即進行微生物學檢驗。主要包括直接鏡檢、檢測特異性抗原或病原體成分、進行分離培養(yǎng)和鑒定、體外藥敏試驗等。
(一)直接鏡檢
1.初步診斷;
2.指導進一步檢出步驟和鑒定方法的選擇;
3.評價標本的質(zhì)量。
(二)快速診斷
快速檢測病原體成分主要是指特異性抗原和核酸檢測。
特異性抗原檢測包括免疫熒光技術(shù)、膠乳凝集試驗、酶免疫技術(shù)、對流免疫電泳、化學發(fā)光免疫測定等。(免疫學檢驗技術(shù))
核酸檢測包括核酸探針雜交、PCR技術(shù)。(分子生物學檢驗技術(shù))
其他快速檢測法還有氣-液相色譜法、化學發(fā)光、生物發(fā)光測定法和基因或蛋白微型陣列芯片技術(shù)等。
(三)直接藥敏試驗
鑒定結(jié)果快,但結(jié)果不明確,故分離出純培養(yǎng)物后應(yīng)再作體外藥物敏感試驗。
(四)常規(guī)檢驗
1.分離培養(yǎng):
通常由正常無菌部位采取的標本接種血平板,置于空氣或含5%~10%CO2的氣缸中培養(yǎng),大部分細菌可于24~48h生長良好。若原始培養(yǎng)為陰性,但據(jù)鏡檢結(jié)果和臨床信息提示可能有病原菌存在,則應(yīng)再采集大量標本,離心濃縮或溶解離心法處理,取沉淀接種營養(yǎng)豐富的需氧或厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)。
對于存在正常菌群部位采集的標本,分離時應(yīng)采用選擇培養(yǎng)基以利于病原菌生長,也可加某些抗生素抑制污染菌的生長。對于某些感染標本中發(fā)現(xiàn)的細菌,如尿路感染的尿液中檢出大腸埃希菌,可能是病原菌,也可能是污染菌或正常菌群,其臨床意義的確定有賴于定量培養(yǎng)法。
2.鑒定:分離出的細菌一般應(yīng)經(jīng)過細菌形態(tài)、菌落特點、生化反應(yīng)、血清學試驗、動物接種等鑒定。目前尚有某些微量鑒定系統(tǒng),其鑒定快速、簡便,值得推廣。如用于鑒定腸桿菌科的20E,鑒定非發(fā)酵菌的20NE及鑒定厭氧菌的20A等。
3.體外純菌藥物敏感性試驗:常用方法包括抑菌試驗、殺菌試驗、醫(yī)學。教育網(wǎng)整理聯(lián)合藥敏試驗和檢測細菌產(chǎn)生的抗生素滅活酶等。
(五)報告
?、僦苯隅R檢要求2h報告,說明標本是否合格,發(fā)現(xiàn)微生物情況和特點;
②初步鑒定和直接藥敏結(jié)果于24h或次晨報告,報告可能的病原菌和直接藥敏結(jié)果;
③最后鑒定和細菌藥敏結(jié)果一般不超過3天,還規(guī)定除血培養(yǎng)外,所有送檢標本必須在24h內(nèi)預(yù)報。