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淋球菌的基因探針診斷

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  淋球菌的基因探針診斷,所用的探針有:質(zhì)粒DNA探針,染色體基因探針和rRNA基因探針。

  (1)質(zhì)粒DNA探針

 ?、匐[蔽質(zhì)粒DNA探針,淋球菌質(zhì)粒分為三種:接合性質(zhì)粒,分子最大,為36kbDNA;耐藥性質(zhì)粒包括兩個(gè)質(zhì)粒,DNA長(zhǎng)分別為5.6kb和7.1kb;隱蔽質(zhì)粒4.2kb.其中隱蔽質(zhì)粒存在于96%的臨床淋球菌分離株中,其它奈瑟菌不含有此質(zhì)粒,故可用它的序列作為特異DNA探針檢測(cè)淋球菌。Torres采用核酸雜交技術(shù)檢測(cè)淋球菌,所用探針為隱蔽質(zhì)粒。用該探針對(duì)134株淋球菌和131株相關(guān)菌株的檢測(cè),有124株淋球菌雜交反應(yīng)陽(yáng)性,占93%,還可與個(gè)別其它的奈瑟菌出現(xiàn)交叉反應(yīng),對(duì)測(cè)定探針的敏感性實(shí)驗(yàn)表明可檢出102CFU淋球菌。研究證明隱蔽質(zhì)粒中CPPB基因序列在所有的淋球菌染色體中(包括不含該質(zhì)粒的菌株)。因此CPPB基因探針具有良好的特異性和敏感性。Torres等用CPPB基因探針檢測(cè)了201份臨床標(biāo)本,采用非放射性地高辛標(biāo)記系統(tǒng),其敏感性和特異性分別為95%和98%.

 ?、谀退幮再|(zhì)粒DNA探針

  淋球菌的抗藥質(zhì)??煞譃椋孩佼a(chǎn)青毒素酶淋球菌(PPNG)其β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性;②具有高水平的質(zhì)粒介導(dǎo)的耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)。

  PPNG菌株是1976年首次在實(shí)驗(yàn)室分離得到的,該菌中含有編碼產(chǎn)青毒酶的基因,該基因既可整合于染色體上也可出現(xiàn)在質(zhì)粒DNA中,而后者居多,稱之為產(chǎn)青毒素酶質(zhì)粒,質(zhì)粒有二種,大小分別為7.4kb和5.3kb.Pescador1998年設(shè)計(jì)一特異的檢測(cè)淋醫(yī)學(xué)教`育網(wǎng)搜集整理球菌編碼β-內(nèi)酰胺酶基因的探針,采用酶化學(xué)發(fā)光法標(biāo)記,液相雜交,用測(cè)光計(jì)測(cè)是特異雜交體的光量。在4h內(nèi)可檢測(cè)104~105CFU的PPNG菌株。TRNG菌株雖對(duì)四環(huán)素耐藥,但通常對(duì)β-內(nèi)酰胺酶類(lèi)及喹諾酮類(lèi)抗菌素敏感。因此,在實(shí)驗(yàn)室藥敏檢測(cè)中可歸為敏感細(xì)菌。Pescador用抗四環(huán)素淋球菌(TRNG)tetm基因的寡核苷酸探針,該基因介導(dǎo)抗四環(huán)素,用酶化學(xué)發(fā)光標(biāo)記,液相雜交,4h內(nèi)可直接從臨床標(biāo)本中檢出含有tetm基因的1.5×104CFu的淋球菌。

  (2)染色體探針

  染色體探針包括已知功能的基因探針,如菌毛DNA探針和paI基因探針,這些基因在淋球菌感染人細(xì)胞的過(guò)程中起著重要作用;未知功能的基因探針,這些探針序列與染色體的特定序列互補(bǔ),但目前還不知這些基因序列的功能。以上兩種染色體探針由于在淋球菌中互補(bǔ)序列的拷貝數(shù)較低,檢測(cè)靈敏度較低,因此一般用的不多,除非有特殊的研究目的。

  (3)rRNA基因探針

  rRNA基因探針是將與rRNA互補(bǔ)的DNA作為探針,該探針的靶序列是rRNA序列。rRNA的基因探針的特點(diǎn)是:①可以增加探針檢測(cè)的靈敏度,rRNA基因探針可同時(shí)檢測(cè)rRNA分子和DNA分子;②rRNA具有進(jìn)化上的保守性;③雜交方法簡(jiǎn)便、快速;④由于rRNA的含量較高,標(biāo)本不需增菌。美國(guó)Gen-Probe公司生產(chǎn)的淋球菌檢測(cè)探針PACEC,是以rRNA及其基因?yàn)闄z測(cè)靶序列,采用放射性標(biāo)記,在2h內(nèi)可以完成檢測(cè),Peter用這種探針檢測(cè)395個(gè)臨床標(biāo)本,結(jié)果靈敏度和特異性分別為92.9%,99.4%,他認(rèn)為PACEC系統(tǒng)篩查臨床標(biāo)本中淋球菌是一個(gè)可靠的方法。該探針還可以檢測(cè)無(wú)癥狀淋球菌感染者,這是目前培養(yǎng)難于達(dá)到的。

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