(1)外標(biāo)法:若標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn),測定組分含量變化不大,可使用外標(biāo)一點(diǎn)法。由于中藥制劑中測定組分含量波動范圍較大,所以最好采用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。
(2)內(nèi)標(biāo)法:中藥制劑組成復(fù)雜,若使用內(nèi)標(biāo)法,會增加分離的難度,其組分很容易干擾內(nèi)標(biāo)峰,所以中藥制劑含量測定中,當(dāng)組成相對簡單,雜質(zhì)不干擾內(nèi)標(biāo)峰時,才使用內(nèi)標(biāo)法。
?。?)供試品溶液的制備 由于高效液相色譜法本身具有分離的功能,因此所用供試品一般經(jīng)提取制得,不在需要純化處理。但組成復(fù)雜的制劑,仍需采用萃取、柱色譜等預(yù)處理方法對供試品進(jìn)行純化處理。
中藥制劑多含有糖,制備供試液時,宜使用高濃度的醇或其他有機(jī)溶劑提取測定組分,最好不使用水為溶劑,以免提出糖污染色譜柱,提取的方法視制劑的情況而定,可采用萃?。ㄓ糜谝后w制劑)、回流或超聲震蕩提取(固體制劑)等。 醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理
由于中藥制劑組成復(fù)雜,分析時應(yīng)在分析柱前加預(yù)柱。分析完畢后一般用水或低濃度的醇水先洗去糖等水溶性雜質(zhì),再用甲醇等有機(jī)溶劑將色譜柱沖洗干凈。
示例 桂枝茯苓丸中桂皮酸的含量測定。本品桂枝為君藥,采用高效液相色譜法測定其中桂皮酸的含量。
供試品的制備 精密稱取本品細(xì)粉約1g,置50ml量瓶中,加50%甲醇40ml,超聲震蕩提取30分鐘,放冷,加50%至刻度,離心10分鐘(1200r/min),取上清液用0.45μm的濾膜過濾,取續(xù)濾液備用。
對照品溶液的制備 精密稱取桂皮酸對照品適量,加50%甲醇定量稀釋成每ml中含0.01mg的溶液。
色譜條件 Inersil 5ODS-Ⅱ柱(25cm×4.6mm);流動相:乙腈-0.1%磷酸(29:71);檢測波長285nm;流速1.0ml/min。
用外標(biāo)法測定其含量。