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建立和利用豬全基因組基因敲除crispr/cas9技術(shù)篩選鑒定豬流感病毒感染相關(guān)的宿主(豬)基因

2018-03-02 09:41

在豬PK15細(xì)胞系中,證實(shí)了CRISPR/Cas9系統(tǒng)在豬細(xì)胞系中能高效地誘導(dǎo)豬基因敲除。設(shè)計(jì)和構(gòu)建了豬全基因組基因敲除CRISPR/Cas9文庫,該文庫包含了65316個(gè)gRNAs、覆蓋了13229個(gè)基因,其中含有5個(gè)gRNAs的基因有11400個(gè)基因、含有4個(gè)gRNAs的基因有1829個(gè),并且全部的基因都含有至少2個(gè)gRNAs(最多不超過5個(gè)gRNAs/基因)。利用該豬全基因組基因突變gRNAs文庫進(jìn)行大規(guī)模的基因篩選,初步篩選出了140個(gè)候選宿主基因,并證實(shí)了其中的32個(gè)候選基因在病毒復(fù)制增殖中具有一定的調(diào)控作用。

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