【摘要】  目的：探討建立一種肝硬化基礎上大鼠肝癌模型的方法。 方法：60只雄性SD大鼠隨機分為兩組，對照組和實驗組，按60 mL/L CCl4和100 mL/L食用白酒的方法誘導肝癌模型。 觀察兩組大鼠不同時期質量變化，死亡率，肝假小葉形成率及肝癌結節(jié)發(fā)生率。 結果：誘導16 wk后， 對照組大鼠質量明顯增加，無死亡，無肝硬化，無肝癌形成。 實驗組大鼠在實驗過程中質量增長緩慢，2 wk后假小葉形成率90%，繼續(xù)誘導4 wk后癌結節(jié)形成率40%. 實驗過程中大鼠的死亡率為10%. 結論：CCl4和食用白酒可成功誘導大鼠肝硬化模型，延長誘導時間可產生一定數(shù)量的肝癌模型。

　　【關鍵詞】  肝硬化； 肝腫瘤； 動物模型； 四氯化碳

　　0引言

　　肝硬化基礎上的肝癌在我國發(fā)病率比較高，也是一種常見及重要的死亡原因。建立一個類似于人類肝硬化基礎上肝癌的動物模型是深入研究肝癌的不可缺少的環(huán)節(jié)。本實驗我們通過腹部皮下注射CCl4并用100 mL/L食用白酒代替飲用水復制大鼠肝硬化模型，通過延長造模時間，來探討建立一種理想的肝硬化基礎上的肝癌動物模型的方法。

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　純系SD雄性大鼠60只，體質量180～220 g，購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心，按清潔級標準飼養(yǎng)，普通顆粒飼料喂養(yǎng)。 四氯化碳（分析純）購自寧波市江東化學試劑廠（批號：9406661）。 橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學試劑廠（批號：930112）。 TD型電子天平（余姚市金諾天平有限公司）由第四軍醫(yī)大學動物實驗中心提供。顯微鏡（Olympus）由西安市鐵路中心醫(yī)院病理科提供。

　　1.2方法

　　將實驗動物隨機分成2組，每組30只。對照組：按3 μL/g體質量給予橄欖油溶液腹壁皮下注射，2次/wk，普通飼料加清水喂養(yǎng)； 實驗組大鼠按3 μL/g體質量給予600 mL/L CCl4橄欖油溶液腹壁皮下注射，100 mL/L食用白酒溶液作為飲用水，普通顆粒飼料喂養(yǎng)16 wk.監(jiān)測實驗期間大鼠體質量變化、活動及對外界的反應情況，同時記錄大鼠死亡情況及死亡時間。 在造模的第4，8，12，和16 wk觀察兩組大鼠肝臟的大體及病理組織變化。

　　統(tǒng)計學處理： 采用t檢驗， P<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

　　2結果

　　2.1大體觀察對照組大鼠毛發(fā)有光澤，精神狀態(tài)好， 活動多，食欲佳，對外界刺激反應靈敏， 實驗組大鼠毛發(fā)凌亂， 無光澤，食欲差，精神萎靡， 活動少，對外界刺激反應慢。 對照組大鼠體質量顯著增加，實驗組大鼠實驗過程中體質量增加緩慢，尤以前期增長更為緩慢。 第12周時，實驗組大鼠體重與對照組大鼠體質重相比差異有統(tǒng)計學意義［（286±12） g vs （398±16） g， P<0.01］。 實驗過程中對照組大鼠無死亡，實驗組大鼠的死亡率為10%.

　　2.2肝臟組織學改變對照組大鼠肝臟紅潤，鏡下細胞大小一致，細胞排列呈條索狀，以中央靜脈為中心呈放射狀，肝竇無狹窄，小葉及匯管區(qū)無炎細胞浸潤，表面光滑無結節(jié)，實驗組大鼠誘導4 wk可見肝細胞變性、壞死，8 wk可見部分肝細胞變性和壞死，壞死以小葉周圍顯著，匯管區(qū)少量炎癥細胞浸潤及纖維組織增生，12 wk可見肝內廣泛假小葉形成，假小葉內可見纖維再分隔現(xiàn)象，現(xiàn)時伴有明顯的肝細胞再生結節(jié)，16 wk癌變肝組織可見癌巢形成，癌細胞具有多形性和明顯異型性呈多角型，核大，核仁明顯，并可見多核巨細胞（圖1）。

　　3討論

　　CCl4是最為常用的肝臟毒素，最早、最廣泛用于實驗性肝纖維化研究［1-2］，其誘導慢性肝損傷的機理是：在肝細胞內質網中，CCl4通過肝微粒體細胞色素氧化酶激活后，產生自由基CCl3及Cl. 還可攻擊膜不飽和脂質，引發(fā)活性氧自由基的產生和脂質過氧化，損傷肝細胞，從而導致狄氏間隙內原本靜止的貯脂細胞活化，釋放Ⅳ型膠原酶，降解Ⅳ型膠原，肝細胞從合成分泌Ⅲ型膠原變?yōu)楹铣煞置贗型膠原，取代了Ⅳ型膠原，促使肝臟纖維化。 乙醇法誘導慢性肝損傷的機制是：乙醇進入肝細胞線粒體三羧酸循環(huán)，脂肪酸氧化減少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝內蓄積導致肝細胞脂肪變。肝臟持續(xù)的炎癥反應激活kupffer細胞，同時乙醇還可以直接損傷血管內皮，甚至發(fā)展為肝硬化。此外， 乙醇可增強CCl4對肝細胞的毒性作用，因此CCl4與乙醇聯(lián)合應用可促進肝硬化的形成。金峰等［3］ 將SD大鼠分為兩組，實驗組給予濃度逐漸增加的CCl4，并用食用白酒代替醫(yī)用乙醇溶液，對照組給予單純CCl4，結果發(fā)現(xiàn)實驗組9 wk內死亡率為7.5％，對照組為17.5％；鏡下假小葉形成率實驗組為90.0％，對照組為75.0％，并認為適度提高CCl4的濃度并采用食用白酒代替醫(yī)用乙醇溶液誘導大鼠肝硬化模型的死亡率低，成模率高。 本實驗在此研究基礎上，我們采用600 mL/L CCl4聯(lián)合100 mL/L乙醇方法誘導肝硬化， 結果發(fā)現(xiàn)實驗組12 wk內大鼠死亡率為10%， 假小葉形成率為90%， 并在此基礎上繼續(xù)給予相同條件誘導4 wk， 結果發(fā)現(xiàn)部分大鼠癌結節(jié)形成，形成率為40%. 實驗表明基于傳統(tǒng)的肝硬化造模方法，通過延長造模時間可以對大鼠的肝臟持續(xù)產生損傷，這種損傷到一定程度可誘發(fā)癌變的發(fā)生，產生一定數(shù)量的肝癌模型。

　　綜上所述，本實驗成功地制備了大鼠肝硬化基礎上的肝癌模型，并在顯微鏡下觀察到了大鼠的肝硬化結節(jié)形成及鏡下癌結節(jié)、癌細胞形成，為以后研究肝癌打下了基礎。

　　【參考文獻】［1］韓德五，馬學慧，趙元昌。 肝硬化動物模型的研究［J］。 山西醫(yī)藥雜志，1979， 4（1）：1-6.

　?。?］Chae HB， Jang LC， Park SM， et al. An experimental model of hepatic fibrosis induced by alcohol and CC14： Can the lipopolysaccharide prevent liver injury induced by alcohol and CC14［J］？ Taehan Kan Hakhoe Chi， 2002， 8（2）：173-178.

　?。?］金峰，衰芳，薛建設，等。 四氯化碳綜合法誘導大鼠肝硬化模型方法的探討［J］。 福建醫(yī)藥雜志，2003，25（5）：127-128.