【關(guān)鍵詞】  腦缺血； 肺； 胃； 死亡率； 病理學(xué)； 大鼠

　　溶栓治療是急性腦梗死恢復(fù)腦血流、挽救缺血腦組織的有效方案，但溶栓后灌注壓的提高可引起腦出血；且由于全身纖溶系統(tǒng)的激活，造成其他組織器官的出血和損傷；血栓溶解可釋放致熱原引起發(fā)熱反應(yīng)。因此，腦缺血再灌注常并發(fā)外周器官損傷，從而加重原有腦部病灶的損傷，引起多器官受損衰竭，甚至導(dǎo)致死亡［1~3］。外周器官受損中以應(yīng)激性潰瘍和間質(zhì)性肺炎為特點(diǎn)的肺、胃組織損傷在臨床常見，積極防治腦缺血再灌注引起的肺、胃組織損傷具有重要意義。我們的前期研究表明，中藥可防治腦缺血再灌注肺、胃組織損傷，提高腦梗死的整體治療水平［4~6］。本研究從中藥復(fù)方腦脈通聯(lián)合溶栓治療對(duì)腦缺血肺、胃組織損傷的保護(hù)作用方面探討其通過減輕腦缺血再灌注外周器官的損傷，以增加溶栓治療的安全性，從而增強(qiáng)其溶栓效果的作用。

　　1  材料與方法

　　1.1  實(shí)驗(yàn)材料  SD大鼠，清潔級(jí)，3～4月齡，260只，雌雄各半，體質(zhì)量（300±50）g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（合格證號(hào)：410117）；聚乙烯導(dǎo)管，武進(jìn)市政平乳膠制品廠產(chǎn)品，型號(hào)F2×70，外徑0.7 mm；尼龍線，日本大東陽(yáng)公司產(chǎn)品，型號(hào)2.5，直徑0.285 mm；凝血酶，濟(jì)南軍區(qū)生物制品藥物研究所產(chǎn)品，批號(hào)H41023661，規(guī)格500 U/支；尿激酶，山東新華制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)05401236，規(guī)格1萬(wàn)U/支；腦脈通顆粒（由大黃、川芎、人參、葛根等組成），河南中醫(yī)學(xué)院藥物分析學(xué)科提供。

　　1.2  分組與處理  大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、用藥組，用藥組又分為尿激酶溶栓組（簡(jiǎn)稱溶栓組）、腦脈通組、腦脈通加尿激酶溶栓組（簡(jiǎn)稱聯(lián)合組），除假手術(shù)組外，其余各組根據(jù)腦缺血后干預(yù)時(shí)間點(diǎn)的不同分為3 h、6 h和9 h組，每組20只動(dòng)物。各組大鼠均于造模前4 d灌胃（1次/d），聯(lián)合組和腦脈通組用腦脈通灌胃（用量為81 mg/kg），其余均灌以等體積的生理鹽水。另外，模型組用生理鹽水，溶栓組與聯(lián)合組用尿激酶，分別于腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行區(qū)域動(dòng)脈給藥，尿激酶用量5 000 U/kg.

　　1.3  造模及取材  自體血栓結(jié)合線栓阻塞大腦中動(dòng)脈制備血栓栓塞性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ停?，8］，留置導(dǎo)管。區(qū)域動(dòng)脈給藥后24 h觀察大鼠神經(jīng)癥狀，冰盤上取腦，制備標(biāo)本，待行指標(biāo)測(cè)定。

　　1.4  觀察指標(biāo)

　　1.4.1  大鼠死亡率  區(qū)域動(dòng)脈用藥后蘇醒大鼠至取材時(shí)，死亡只數(shù)與總體大鼠（動(dòng)脈用藥后死亡和存活的總數(shù)）的比率。

　　1.4.2  顱內(nèi)和胃出血率  動(dòng)脈用藥后大鼠尸檢、存活大鼠裸眼觀察及光鏡下病理?yè)p傷見出血者統(tǒng)計(jì)例數(shù)，分別計(jì)算腦和胃出血只數(shù)與總只數(shù)的比率。

　　1.4.3  腦和肺及胃組織病理觀察  切取缺血側(cè)腦組織和左肺及胃竇，分別用10%的中性福爾馬林液固定，常規(guī)脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，染色。光鏡下觀察病理形態(tài)改變。受損程度由輕到重進(jìn)行分級(jí)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（鏡下見出血者均為Ⅳ級(jí)）［9，10］：Ⅰ級(jí)0～25%，Ⅱ級(jí)26%～50%，Ⅲ級(jí)51%～75%，Ⅳ級(jí)＞75%.觀察不同分級(jí)的大鼠例數(shù)。

　　1.4.4  腦梗死面積  切取的腦組織放入2%四氮唑溶液，37 ℃水浴鍋溫孵30 min后放入10%甲醛溶液，15 min后取出腦組織，用數(shù)碼相機(jī)對(duì)腦片（額側(cè)）進(jìn)行拍照，應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件測(cè)定腦片梗死面積與相應(yīng)側(cè)總面積，計(jì)算面積比值。計(jì)算公式：面積比值（％）=梗塞面積/總面積×100.

　　1.4.5  肺組織含水量  取右側(cè)肺組織，迅速用電子天平稱取濕質(zhì)量（精確度為0.1 mg）后放入干燥箱中干燥（100±2）℃，24 h后稱取干質(zhì)量。計(jì)算公式：肺組織含水量（%）=（肺濕質(zhì)量－肺干質(zhì)量）/肺濕質(zhì)量×100.

　　1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  數(shù)據(jù)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)；相對(duì)數(shù)用Fisher精確檢驗(yàn)法；計(jì)量資料以x±s表示，行單因素方差分析。

　　2  結(jié)果

　　2.1  大鼠死亡率  分組是均衡的，但兩次操作，大鼠的死亡數(shù)不同，各組計(jì)算死亡率的總例數(shù)包括了3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的總只數(shù)。腦缺血大鼠死亡率較假手術(shù)組高（P＜0.01）；腦脈通組和聯(lián)合組均較模型組低（P＜0.05）；聯(lián)合組明顯低于溶栓組（P＜0.05）。見表1.

　　2.2  大鼠顱內(nèi)和胃出血率  因?yàn)槟X組織的取材要求嚴(yán)格，如果動(dòng)作慢一點(diǎn)，取腦時(shí)間超過2 min，視為不合格取材，要剔除，45只大鼠取材合格。取胃的大鼠只數(shù)比腦組織多，其中包括大鼠死亡后即可進(jìn)行尸體解剖觀察的只數(shù)。腦缺血大鼠顱內(nèi)和胃出血率高于假手術(shù)組（P＜0.01）；聯(lián)合組均較模型組低（P＜0.05）；聯(lián)合組明顯低于溶栓組（P＜0.05）。見表2、表3.

　　表1  各組大鼠死亡率（略）

　　Table 1  Rat mortality in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　表2  各組大鼠腦組織出血率（略）

　　Table 2  Rat brain hemorrhage ratio in each group

　　*P＜0.05， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　表3  各組大鼠胃組織出血率（略）

　　Table 3  Rat stomach hemorrhage ratio in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　2.3  腦梗死面積  動(dòng)物只數(shù)是所有取材合格后再剔除測(cè)量不合理的動(dòng)物，最后納入統(tǒng)計(jì)的只數(shù)，是每個(gè)分組的數(shù)目。模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦梗死面積均較假手術(shù)組大（P＜0.01）；各相應(yīng)時(shí)間用藥組大鼠腦梗死面積均明顯小于模型組（P＜0.01）；各組6 h和9 h組均較3 h組增加，用藥組9 h較6 h增高（P＜0.01）；聯(lián)合用藥6 h和9 h組腦梗死面積明顯小于相應(yīng)時(shí)間的溶栓組和腦脈通組（P＜0.01）。見表4.

　　2.4  肺組織含水量  模型組各時(shí)間點(diǎn)肺含水量均明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）；各用藥組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)肺含水量均低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組（P＜0.01， P＜0.05）；聯(lián)合組9 h的肺含水量低于溶栓組和腦脈通組（P＜0.05）；各組6 h和9 h的肺含水量均較其3 h組增加，9 h也分別較其6 h增加（P＜0.01， P＜0.05）。見表4.

　　表4  各組大鼠腦梗死面積和肺組織含水量變化（略）

　　Table 4  Rat brain infarct size and lung water content in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， ▲▲P＜0.01， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， □□P＜0.01， vs 3 h of the same group； ■P＜0.05， ■■P＜0.01， vs 6 h of the same group.

　　2.5  腦組織病理改變  模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織病理?yè)p傷均較假手術(shù)組明顯（P＜0.01）；各用藥組大鼠均較相應(yīng)時(shí)間模型組輕（P＜0.01）；各組9 h病理?yè)p傷均較3 h明顯（P＜0.05）；聯(lián)合用藥組3 h和9 h較相應(yīng)時(shí)間溶栓組和腦脈通組損傷輕（P＜0.05）。見表5.n為每一個(gè)組進(jìn)行顯微鏡下觀察的病理切片數(shù)。

　　2.6  胃組織病理?yè)p傷  各模型組胃組織病理?yè)p傷均較假手術(shù)組明顯（P＜0.01）；除溶栓組9 h外，其余各用藥組大鼠胃組織病理?yè)p傷均較模型組輕（P＜0.01）；模型組和溶栓組9 h較3 h加重（P＜0.05）；聯(lián)合組9 h較溶栓組輕（P＜0.05）。見表6.n為每一個(gè)組進(jìn)行顯微鏡下觀察的病理切片數(shù)。

　　2.7  肺組織病理改變  模型組各時(shí)間大鼠肺組織病理?yè)p傷均較假手術(shù)組明顯（P＜0.05， P＜0.01）；各用藥組6 h和9 h均較相應(yīng)時(shí)間模型組的損傷輕（P＜0.05）；聯(lián)合組9 h的肺組織損傷較溶栓組輕（P＜0.05）；模型組9 h和6 h以及各用藥組9 h的損傷分別較3 h加重，除腦脈通外，各組9 h的損傷均較其6 h明顯（P＜0.05， P＜0.01）。見表6.

　　表5  各組大鼠腦組織病理?yè)p傷分級(jí)（略）

　　Table 5  Rat brain pathological change in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， vs 3 h of the same group.

　　表6  各組大鼠胃和肺組織病理?yè)p傷分級(jí)（略）

　　Table 6  Rat stomach and lung pathological changes in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， ▲▲P＜0.01， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， □□P＜0.01， vs 3 h of the same group； ■P＜0.05， vs 6 h of the same group.

　　3  討論

　　急性腦血管疾病常常繼發(fā)心肌梗死、肺水腫、急性胃黏膜病變、腎功能衰竭等器官損傷。急性腦梗死引起腦水腫發(fā)生，顱內(nèi)壓增高，影響到下丘腦，使神經(jīng)體液發(fā)生紊亂，出現(xiàn)一系列的應(yīng)激反應(yīng)，更易誘發(fā)或加重外周器官的功能衰竭［2， 11， 12］。由急性腦梗死引起的外周器官功能損傷甚至衰竭可導(dǎo)致連鎖反應(yīng)，發(fā)生多器官功能損傷甚至衰竭，使其死亡率更高，救治極為困難，嚴(yán)重威脅患者的生命及其預(yù)后。肺水腫和肺炎是急性腦梗死常見的并發(fā)病癥。腦缺血早期可導(dǎo)致肺損傷，損傷后肺組織可出現(xiàn)典型的病理改變，表現(xiàn)為肺間質(zhì)充血或出血，肺泡腔內(nèi)有少量漿液性滲出及較多的吞噬細(xì)胞［13~15］。腦梗死多發(fā)于老年人，其肺臟組織形態(tài)和功能衰退，當(dāng)發(fā)生腦梗死時(shí)容易導(dǎo)致肺組織損傷。因此，積極治療老年人腦梗死的同時(shí)，防治由其導(dǎo)致的肺臟病變，對(duì)于提高腦梗死的整體治療水平具有實(shí)際意義［9］；此外，由急性腦梗死引起的外周器官損傷中，胃損傷的發(fā)生率較高。腦梗死后，病變累及下丘腦自主神經(jīng)及其腦干下行通路，使迷走神經(jīng)功能亢進(jìn)，胃液分泌增加，胃腸蠕動(dòng)加快，內(nèi)臟血管舒縮障礙，胃腸黏膜缺血而出現(xiàn)應(yīng)激性潰瘍，典型的損傷表現(xiàn)為胃缺血和胃出血，而且胃功能的損傷和衰竭可加重原有腦部病灶的損傷，引起機(jī)體各器官受累，容易導(dǎo)致死亡［2， 3］。我們前期的研究表明，中醫(yī)藥對(duì)腦缺血外周器官肺、胃組織的損傷具有保護(hù)作用［4， 6］。迅速再通血管、恢復(fù)血流是溶栓治療最基本的治療方法，但溶栓治療可引起上消化道出血，使胃的損傷加重［16， 17］。因此，尋求能夠溶解血栓、減輕或消除腦缺血再灌注外周器官損傷的有效方藥，具有重要意義。研究顯示，腦缺血可引起肺、胃組織病理?yè)p傷，肺含水量增加，且隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，損傷呈加重趨勢(shì)；腦脈通和溶栓治療對(duì)腦缺血腦組織和肺及胃損傷均具有不同程度的保護(hù)作用，但以二者聯(lián)合的作用更為明顯，腦脈通聯(lián)合溶栓治療可明顯降低大鼠死亡率、顱內(nèi)和胃出血率，減小腦梗死面積，減輕腦、肺和胃組織病理?yè)p傷，減輕肺水腫，其確切的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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