【摘要】目的： 探討3羧基磷脂酰肌醇激酶（PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（pAKT）在上皮性卵巢腫瘤組織中的表達、相互關系及其意義。 方法： 應用免疫組化方法，檢測20例正常卵巢、20例卵巢良性上皮腫瘤、60例卵巢癌組織中PI3K和pAKT蛋白的表達。 結果： PI3K在卵巢癌組織中陽性表達率為58.3%，高于正常卵巢和良性上皮腫瘤組織的5%， 20%（P<0.01）。 pAKT在卵巢癌組織中陽性表達率為53.3%，高于正常卵巢和良性上皮腫瘤組織的10%， 20%（P<0.01）。 PI3K和pAKT蛋白表達與卵巢癌臨床分期、病理分級、有無淋巴結轉移和遠處轉移有關（P均<0.05），而與年齡、病理類型、有無腹水無關（P均>0.05）。 卵巢癌組織中PI3K和pAKT蛋白間的表達呈正相關（rs=0.501， P<0.001）。 結論： AKT是PI3K的一個重要靶基因，PI3K/AKT信號傳導通路異?；罨c卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關。

　　【關鍵詞】  卵巢腫瘤 1磷脂酰肌醇3激酶 AKT

　　0.引言

　　PI3K/AKT信號傳導通路的異?；罨梢允鼓[瘤細胞逃避凋亡，異常增殖分化，促進腫瘤血管新生和腫瘤發(fā)生。 已經發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細胞中PI3K催化亞單位（P110）的擴增和AKT的變異。 AKT的上游調節(jié)基因是PI3K，一旦PI3K激活AKT，AKT可磷酸化一些和細胞凋亡直接或間接相關的底物蛋白，促進卵巢癌的發(fā)生。 化療藥物可以通過PI3K/AKT途徑使DNA修復及細胞產生調亡。 人們一直希望通過卵巢癌發(fā)生、發(fā)展分子機制的研究尋找新的治療靶基因，為此我們應用免疫組化方法探討PI3K/AKT通路中PI3K和磷酸化AKT（pAKT）在卵巢癌組織中的表達及相互關系，為進一步加深對卵巢癌發(fā)病機制的理解，并為卵巢癌的治療提供新思路。

　　1.材料和方法

　　1.1材料200001/200701手術切除和病理檢查確診的上皮性卵巢癌60例，其中漿液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌23例，年齡16～78（中位47）歲；正常卵巢組織20例，來源于同期因子宮肌瘤手術的標本；卵巢良性上皮性腫瘤組織20例，其中漿液性囊腺瘤12例，黏液性囊腺瘤8例。 上皮性卵巢癌按組織學分級分為：高分化（G1）15例，中分化（G2）22例，低分化（G3）23例；按FIGO（1988年）的分類標準，Ⅰ~Ⅱ期39例，Ⅲ~Ⅳ期21例。 有淋巴結轉移者36例，無淋巴結轉移者24例。 所有患者均為初發(fā)，術前均未接受過放化療。 兔抗人PI3K多克隆抗體（工作濃度為1∶100），購自北京中杉金橋生物技術有限公司。 兔抗人pAKT多克隆抗體（工作濃度為1∶50），購自美國CST公司。

　　1.2方法免疫組化SP法。 每批染色均設陰性和陽性對照。 陰性對照采用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗，陽性對照取PI3K和pAKT表達陽性的乳腺癌組織的石蠟切片。 光學顯微鏡下隨機選取5個視野，每個視野記數100個細胞，計算陽性細胞數占總細胞數的百分比，取5個視野的算術平均值。 ① 根據顯色細胞的比例計分：0分（顯色癌細胞為0％）；1分（顯色細胞<10%）；2分（顯色細胞10%～50%）；3分（顯色細胞51%～80%）；4分（顯色細胞>80%）。 ② 根據細胞染色強度計分：0分（癌細胞無顯色）；1分（淺黃色）；2分（棕黃色）；3分（黃褐色）。 積分=染色強度×陽性細胞數，積分范圍0～12分，≥4分定義為陽性表達。

　　統(tǒng)計學處理： 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。 采用統(tǒng)計學方法為χ2檢驗和Spearman等級相關。

　　2.結果

　　2.1PI3K和pAKT蛋白在卵巢組織中的表達PI3K和pAKT蛋白在正常組和良性組的陽性表達率明顯低于卵巢癌組（P<0.01）。 PI3K的陽性表達為黃棕色或黃褐色均勻顆粒狀，以胞質為主部分細胞核著色。 pAKT的陽性表達為黃棕色或黃褐色均勻顆粒狀，細胞質著色。

　　2.2PI3K和pAKT表達與卵巢癌臨床病理的關系PI3K和pAKT蛋白表達與卵巢癌臨床分期、病理分級、有無淋巴結轉移和遠處轉移有關（P<0.05），而與年齡、病理類型和有無腹水無關（P﹥0.05，表2），而且兩者相關（rs=0.501， P<0.001）。 表2PI3K和pAKT蛋白的表達與卵巢癌臨床病理的關系

　　3.討論

　　PI3K/AKT信號傳導通路參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展［1］。 PI3K是異二聚體，由催化亞基（P110）和調節(jié)亞基（P85）組成［2］。 AKT是位于PI3K下游的一個重要激酶，二者均是促進細胞生存和維持細胞正常功能關鍵的信息分子，并且構成細胞對外應激反應過程中促進細胞生長、抑制細胞凋亡和維持細胞重要功能的信號傳遞鏈。 有研究表明，P110α干擾RNA可以顯著減少卵巢癌細胞的遷移、侵襲和增殖。 PIK3CA在約80％的早期卵巢癌細胞和一些上皮性卵巢癌中表達增高。 Levine等［3］在198例高分期卵巢上皮癌組織中對編碼PI3CA高度保守區(qū)域進行基因測序，發(fā)現(xiàn)PI3CA在卵巢癌的發(fā)生中起重要作用。 PI3K信號通路通過AKT和其他效應器起作用，參與了多種細胞的發(fā)生發(fā)展進程，包括細胞周期調整、細胞生存、細胞黏附和運動、血管發(fā)生、葡萄糖代謝的穩(wěn)定等。 AKT由氨基端的PH結構域、中間的激酶活性區(qū)及羧基端的尾部三部分構成。 目前已發(fā)現(xiàn)至少存在3種PKB家族成員：PKBα/β/γ（AKT1/2/3） . Thr308和Ser473兩個位點同時磷酸化是AKT活化所必需的。 許多刺激因子如生長因子、白介素等均可激活AKT. 卵巢癌組織中常有PKBβ基因擴增和過度表達以及PKBβ激酶活性的增高，且與卵巢癌的惡性生物學行為密切相關。 有研究證實PI3K和AKT2的頻繁激活和（或）過度表達在卵巢癌中普遍存在［4］，導致細胞抵抗死亡或死亡延遲［5］。 AKT活化促使腫瘤細胞對化療藥物和放射治療產生耐受［6］。 這表明AKT的活化可以抑制細胞調亡，進一步說明pAKT參與卵巢癌的發(fā)展。 因此pAKT可能和卵巢癌患者的預后有關，并可能為卵巢癌提供新的治療靶點。［醫(yī)學　教育網 搜集整理］

　　我們發(fā)現(xiàn)，PI3K和pAKT蛋白在正常卵巢組織中的陽性表達率顯著低于在卵巢癌中的表達，臨床期別越晚、病理分級越高，蛋白陽性表達率越高。 兩者的表達還與淋巴結轉移、遠處轉移有關，而與患者的年齡、病理類型、有無腹水無關，提示PI3K和pAKT與卵巢癌細胞的增生、轉移、浸潤及預后有關。 其機制可能與AKT通過激活其底物如增加細胞周期素D轉錄、還可以通過磷酸化P21使細胞周期加速，促進腫瘤發(fā)展有關。 總之，這些研究提示，抑制PI3K/AKT信號通路可能對癌癥患者具有治療價值。

　　【參考文獻】

　　［1］郭瑞霞，魏麗惠。 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信號傳導通路與婦科惡性腫瘤的研究進展［J］。 中華婦產科雜志，2005，40：358-360。

　?。?］Gao J， Flynn DC， Bellone S， et al. G1 cell cycle progression and the expression of G1 cyclins are regulated by PI3K/AKT/mTOR/p70S6K1 signaling in human ovarian cancer cells［J］。Am J Physiol Cell Physiol，2004，287：281-291。

　?。?］Levine D， Bogomolniy F， Yee C， et al. Frequent mutation of gene PI3KCA in ovarian and breast cancers［J］。 Clin Cancer Res， 2005，11：2875-2878。

　　［4］Cheng J， Chou C， Kuo M， et al. Radiationenhanced hepatocellular carcinoma cell invasion with MMP9 expression through PI3K/Akt/NFkappaB signal transduction pathway［J］。 Oncogene，2006，25：7009-7018。

　　［5］Fresno A， Casado E， Castro J， et al. PI3K/Akt signaling pathway and cancer［J］。Cancer Treat， 2004，30：193-204。

　?。?］Vivanco I， Sawyers C. The phosphatidylinositol 3Kinase AKT pathway in human cancer［J］。Nat Rev Cancer， 2002，2：489-501。