摘要目的：探討白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactorα，TNFα）對(duì)牙周組織的作用。方法：將IL-1β、TNFα注入到兔的牙周組織，以生理鹽水為對(duì)照，不同時(shí)期取材做組織學(xué)觀察和評(píng)價(jià)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組15天后牙齦組織血管擴(kuò)張充血，牙槽骨改建活躍，有大量的骨吸收陷窩及破骨細(xì)胞，并有新骨形成和破骨細(xì)胞出現(xiàn)；30天后僅表現(xiàn)為大量的骨陷窩及破骨細(xì)胞，無(wú)成骨現(xiàn)象，且以聯(lián)合應(yīng)用IL-1β、TNFα組最顯著。結(jié)論：IL-1β、TNFα均能引起牙齦炎癥反應(yīng)、附著上皮和牙槽骨的破壞，提示IL-1β、TNFα在牙周組織疾病中有作用。

　　關(guān)鍵詞　白細(xì)胞介素1β腫瘤壞死因子α牙周組織

　　破骨細(xì)胞活化因子（osteoclastactivatingfactor，OAF）是引起牙槽骨破壞的重要因素，其中白細(xì)胞介素1（interleukin-1，IL-1）和腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF）是主要因子［1］，它們不僅有破骨作用，而且有成骨作用。本實(shí)驗(yàn)將IL-1β和TNFα直接注入兔的牙周組織后，觀察其組織病理學(xué)變化，目的是通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討IL-1β和TNFα對(duì)牙周組織的作用，探討其發(fā)病機(jī)理，并期望能指導(dǎo)臨床預(yù)防和治療牙周病。

　　材料與方法

　　1.材料：將24只健康大耳白兔隨機(jī)分為4組，每組6只，生理鹽水對(duì)照組（A），IL-1β組（B），TNFα（組）（C），IL-1β和TNFα聯(lián)合組（D）。IL-1βα和TNFα購(gòu)自中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物制劑研究中心。

　　2.方法：麻醉動(dòng)物，消毒，在雙側(cè)上、下磨牙頰側(cè)齦緣下3mm附著齦處注射給藥，對(duì)照組給予生理鹽水。各組給藥3次后，第15天各組均處死3只，其余的再給藥3次，第30天全部處死。給藥間隔時(shí)間和每次給藥劑量（見(jiàn)表1）。

表1　給藥間隔時(shí)間和每次劑量

　　3.標(biāo)本處理及組織學(xué)染色：處死動(dòng)物，取兔注射部位的牙齒及牙周組織，肉眼觀察并照相，標(biāo)本沖洗后置于10%福爾馬林液中固定48h，組織修復(fù)后置入乙二氨四乙酸（ethylendiaminotetraaceticacid，EDTA）脫鈣液中，常規(guī)脫水，浸蠟，包埋，制備6～8μm頰舌向縱切片，HE染色，組織學(xué)觀察并照相。

　　結(jié)果

　　1.肉眼觀察：A組牙齦組織呈粉紅色，無(wú)充血水腫，無(wú)炎癥性改變。B、C、D組分別在用藥10d，15d，7d牙齦組織輕度充血。

　　2.組織學(xué)觀察：A組血管無(wú)擴(kuò)張充血，牙槽骨及牙骨質(zhì)無(wú)破壞，牙周膜纖維排列規(guī)則。B、C、D組用藥15d均可見(jiàn)血管明顯擴(kuò)張充血，牙槽骨改建活躍，在牙槽嵴頂及固有牙槽骨可見(jiàn)大量骨吸收陷窩和多核破骨細(xì)胞，在骨吸收基礎(chǔ)上可見(jiàn)骨嗜鹼性線增強(qiáng)，新骨形成和成排的成骨細(xì)胞，骨新生后再吸收。C、D組牙周膜間隙擴(kuò)大，成纖維細(xì)胞豐富，B、C、D組用藥30d，在牙槽嵴頂及固有牙槽骨只見(jiàn)明顯的骨吸收陷窩及多核破骨細(xì)胞，而無(wú)新生骨及成骨細(xì)胞。D組與B、C組比較可見(jiàn)附著上皮破壞，牙骨質(zhì)表面出現(xiàn)明顯吸收，牙周膜主纖維排列紊亂，極性喪失，個(gè)別區(qū)域纖維束中斷。（圖1～4）

圖1　B、C、D組15d，血管擴(kuò)張充血，牙槽骨改建活躍（HE×20）

圖2　B、C、D組30d，只見(jiàn)骨吸收陷窩及破骨細(xì)胞（HE×20）

圖3　D組30d，牙骨質(zhì)表面吸收（HE×20）

圖4　D組30d，牙周膜主纖維束排列紊亂（HE×20）

　　討論

　　1.IL-1β對(duì)牙周組織的作用

　　牙周組織中的上皮細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞能分泌IL-1，因此學(xué)者們推測(cè)IL-1在牙周組織的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)及牙槽骨吸收中起到一定的作用。Charon等人［2］應(yīng)用胸腺增殖試驗(yàn)檢測(cè)齦溝液中的IL-1，發(fā)現(xiàn)炎癥區(qū)IL-1濃度明顯高于非炎癥區(qū)，Jandinski等人［3］利用免疫熒光技術(shù)，在正常的牙齦乳頭中及中度、重度牙周炎牙齦乳頭中均發(fā)現(xiàn)IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與牙周組織破壞有關(guān)。IL-1刺激骨吸收作用很強(qiáng)，體外作用濃度為1.3×10－12～3.1×10－10mol，半最大刺激濃度為1.4×10－11mol［1］。本研究每次以1000u/0.1ml的劑量給藥，結(jié)果表明IL-1β對(duì)牙周軟組織能夠引起明顯的炎癥反應(yīng)，對(duì)牙槽骨亦具有明顯的作用。應(yīng)用IL-1β初期對(duì)牙槽骨既有破骨細(xì)胞產(chǎn)生又有成骨細(xì)胞存在，提示應(yīng)用IL-1β15天左右既有顯著的破骨作用，同時(shí)也有顯著的成骨作用；但是在后期（應(yīng)用IL-1β30d）只表現(xiàn)出顯著的破骨作用而無(wú)成骨作用。

　　2.TNF α對(duì)牙周組織的作用

　　TNF α對(duì)牙周組織的作用主要與TNF的濃度有關(guān)，濃度的不同對(duì)骨吸收的作用不同。Pluijm等［4］指出低濃度的TNF增加成熟骨細(xì)胞的數(shù)量，高濃度的TNF幾乎沒(méi)有見(jiàn)到成熟的破骨細(xì)胞。有關(guān)TNF與牙周炎的關(guān)系研究報(bào)道不多，對(duì)TNF在牙周炎牙槽骨的吸收中的作用尚缺乏一致意見(jiàn)。TNF的破骨吸收活性是IL-1β的1/1 000，其作用濃度為10－7～10－9mol， 最大活性濃度為10－7mol［1］。本研究結(jié)果表明，TNF濃度100 000u/ml注射于兔的牙齦組織中，15d牙齦組織發(fā)生輕度充血，在時(shí)間上較IL-1β炎癥反應(yīng)要遲，但反應(yīng)程度一致。組織病理學(xué)表現(xiàn)二者也一致，同時(shí)出現(xiàn)明顯骨吸收及成骨作用；注射30d只有破骨吸收而無(wú)成骨作用。提示應(yīng)用濃度為100 000u/ml的TNF α作用于牙槽骨組織，其破骨作用與用藥次數(shù)和時(shí)間相關(guān)。用藥次數(shù)少和時(shí)間短，對(duì)牙槽骨既有破骨作用又有成骨作用；用藥次數(shù)多和時(shí)間長(zhǎng)，只有破骨作用而無(wú)成骨作用。

　　3.IL-1β與TNF α對(duì)牙周組織的聯(lián)合作用

　　牙周病發(fā)病過(guò)程不是單一發(fā)病因素。本研究設(shè)立了IL-1β與TNF α聯(lián)合作用牙周組織的實(shí)驗(yàn)組，觀察了IL-1β和TNF α聯(lián)合應(yīng)用對(duì)兔牙周組織的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示IL-1β與TNF α聯(lián)合作用于兔的牙周組織，一方面引起牙齦組織炎癥的程度比單純應(yīng)用IL-1β、TNF α嚴(yán)重，在炎癥發(fā)生的時(shí)間上比單獨(dú)純應(yīng)用IL-1β、TNF α提前；但對(duì)牙槽骨破壞吸收方面基本與單純應(yīng)用IL-1β、TNF α反應(yīng)相同。IL-1β與TNF α聯(lián)合應(yīng)用對(duì)鄰近牙齒的牙骨質(zhì)有破壞吸收作用，同時(shí)對(duì)附著上皮及牙周膜也有破壞作用。

　　作者單位：長(zhǎng)春市（130041）白求恩醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院

　　參考文獻(xiàn)

　　1.張煒真。 破骨細(xì)胞活化因子及其在牙周炎發(fā)病中的作用。 國(guó)外醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè)，1994， 21（3）：161～165

　　2.Charon JA， Luger TA， Mergenhagen SE， et al. Increased thymocyte activating factor in human gingival inflammation. Infect Immunol， 1982，38：1190

　　3.Jandinski JJ， Stashenko P， Feder LS， et al. Localization of interleukin 1β in human periodontal tissue. J Periodont， 1991，62：36

　　4.Vander Pluijm G， Most W， vander Wee-Pals， et al. Two distinct effect of recombinant human tumor necrosis factor-α on osteoclast development and subsequent resorption of ineralizde maxtrix. Endocrinol， 1991，129：1596