免疫細(xì)胞的分離方法是什么?
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1.單個核細(xì)胞分離
Ficoll分離液是一種單次密度梯度離心分離法,主要用于分離外周血中單個核細(xì)胞(PBMC),包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。其分布由上到下依次為:稀釋的血漿層、單個核細(xì)胞層、粒細(xì)胞層和紅細(xì)胞層。
2.淋巴細(xì)胞的分離
①分離原理:利用單核細(xì)胞能主動黏附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性,從單個核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞,從而獲得純淋巴細(xì)胞群。
②除去單核細(xì)胞分離方法:黏附貼壁法、吸附柱過濾法、磁鐵吸引法(吞噬特性)。
③Percoll分離法:是一種連續(xù)密度梯度離心分離法。Percoll液和PBS等量混合,經(jīng)高速離心后可形成一個連續(xù)密度梯度,不同密度的細(xì)胞將懸浮于各自不同的密度區(qū)帶,從而將密度不等的細(xì)胞分離純化。
3.T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離
①E花環(huán)沉降法:T細(xì)胞有綿羊紅細(xì)胞受體(E受體/CD2受體)。
②EA花環(huán)沉降法:B細(xì)胞表面有l(wèi)gG Fc受體,能與免疫球蛋白(lgG)的Fc段結(jié)合。
4.T細(xì)胞亞群的分離
原則:根據(jù)相應(yīng)細(xì)胞的特性和不同表面標(biāo)志。
●親和板結(jié)合分離法:各種淋巴細(xì)胞亞群具有不同的抗原表位。
●磁性微球分離法
●熒光激活細(xì)胞分離儀分離法
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