免疫比濁測定的影響因素-檢驗職稱考點
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1.抗原抗體的比例 是濁度形成的關(guān)鍵因素。
形成的IC分子小,而且會發(fā)生再解離,使?jié)岫确炊陆?,光散射亦減少,這就是高劑量鉤狀效應。當抗體過量時,IC的形成隨著抗原遞增而增加,至抗原、抗體最適比例處達最高峰,這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。
在反應體系中需保持抗體適當過量,如形成抗原過量則造成測定的準確性降低。
2.抗體的質(zhì)量 對免疫比濁測定法的抗體要求
(1)特異性強
(2)效價高:低效價(<1:20)抗體會增加非特異性濁度(偽濁度)的產(chǎn)生。
(3)親和力強:則抗體的活性高,可加快抗原抗體反應的速度,且形成的IC較牢固,不易發(fā)生解離。
(4)R型和H型抗體:
R型抗體是指以家兔為代表的小型動物被注射抗原免疫后制備的抗血清。這類抗血清的特點是親和力較強,抗原抗體結(jié)合后不易發(fā)生解離。
H型抗體是指以馬為代表的大型動物注射抗原后制備的抗血清,這類抗血清的親和力弱,抗原抗體結(jié)合后極易解離。
3.抗原抗體反應的溶液
反應液最適pH為6.5~8.5。常使用磷酸鹽緩沖液作為免疫比濁法的反應液。
在一定范圍內(nèi),離子強度大,IC形成越快。
4.增濁劑
某些非離子型親水劑對促進IC的形成有顯著的增強作用,如聚乙二醇(PEG)、吐溫-20,其作用是消除蛋白質(zhì)(抗原或抗體)分子周圍的電子云和水化層,促進抗原、抗體分子靠近,結(jié)合形成大分子復合物。
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