瘧疾核酸免疫的研究進(jìn)展

2004-10-06 10:47 醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

　　聯(lián)合國(guó)開發(fā)計(jì)劃署/世界銀行/世界衛(wèi)生組織聯(lián)合倡建的熱帶病特別規(guī)劃防治的6種主要熱帶病中，除麻風(fēng)病外，其余5種都是寄生蟲病，而瘧疾則是危害性最大的一類寄生蟲病。盡管全國(guó)世界以蚊媒控制和藥物治療為中心的大規(guī)模防治計(jì)劃開展了近40年，但目前仍有100個(gè)國(guó)家和地區(qū)不同程度地受到疾疾的威脅。由于環(huán)境改變和流動(dòng)人口的增加，受威脅人口很大的可變性。據(jù)估計(jì)，1994年有23億人口（占世界人口的41%）居住在受瘧疾威脅的地區(qū)。估計(jì)全世界瘧疾發(fā)病每年3－年億例，死亡人數(shù)為150－270萬人。大約100萬例5歲以下兒童死亡是由瘧疾或同時(shí)伴有其它疾病所致[1]，因而瘧疾疫苗的研制勢(shì)在必行，并已成為瘧疾防治中的重要內(nèi)容。

　　瘧原蟲生活史有多個(gè)時(shí)期，每個(gè)生活史期有多種抗原，而且每種抗原具有多個(gè)表位，有些抗原還有多個(gè)等位基因，相同抗原又有多種結(jié)構(gòu)形式，免疫系統(tǒng)有多種作用因子，而不同宿主的免疫反應(yīng)也不相同，所有的這些因素給瘧疾疫苗的研制帶來了許多困難[2].從現(xiàn)有的瘧疾疫苗看，瘧疾的第一代疫苗——全蟲減毒疫苗激發(fā)的免疫反應(yīng)低下，臨床試驗(yàn)效果不佳。即使是寄予厚望的第二代疫苗——基因工程亞單位疫苗和化學(xué)合成多肽疫苗，也由于表達(dá)產(chǎn)物翻譯后的修飾功能較差難以確?？乖奶烊粯?gòu)型及免疫原性，特別是對(duì)保護(hù)性抗原多為糖蛋白的蟲體生活史時(shí)期來說更是難以達(dá)到免疫保護(hù)效果，同時(shí)表達(dá)產(chǎn)物的純化過程也極為復(fù)雜，給實(shí)際應(yīng)用帶來了困難。因此，近年興起的核酸免疫為瘧疾疫苗的研制帶來了希望。核酸疫苗被看作是極具發(fā)展?jié)摿Φ牡谌呙鏪3].核酸免疫已成為預(yù)防和治療傳染病的一種有希望的基因治療方法，帶有病原體抗原基因的質(zhì)粒DNA直接導(dǎo)入宿主細(xì)胞，可激發(fā)出針對(duì)編碼抗原的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答和/或體液免疫應(yīng)答[4].在短短的幾年中核酸免疫已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，本文就核酸免疫在瘧疾疫苗研制中的應(yīng)用作一綜述。

　　1鼠約氏瘧原蟲的DNA疫苗

　　1.1環(huán)子孢子DNA疫苗

　　約氏瘧原蟲（P，yoelii）環(huán)子孢子蛋白（CSP，391aa）（簡(jiǎn)稱為PyCSP）是子孢子表面表達(dá)最多的一種抗原，它也可表達(dá)于紅外期寄生蟲的質(zhì)膜和納蟲泡膜上。PyCSP是保護(hù)性免疫應(yīng)答的靶抗原，過繼轉(zhuǎn)移PyCSP特異的CD8+和CD4+T細(xì)胞可保護(hù)小鼠的子孢子攻擊感染。而在體外，PyCSP特異的CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL）可以MHC-限制方式消滅培養(yǎng)感染肝細(xì)胞，而且針對(duì)PyCSP高度顯位重復(fù)區(qū)的抗體可在體外抑制子孢子的侵入，并可被動(dòng)傳遞免疫保護(hù)作用給未受感染的小鼠[5].

　　Sedegah等[6]將重新構(gòu)建的含有PyCSP基因的質(zhì)粒DNA直接肌肉注射免疫小鼠，并與輻射減毒子孢子的免疫效果相比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，核酸免疫小鼠可發(fā)產(chǎn)生抗CSP的特異性抗體和CTL反應(yīng)，它們的反應(yīng)水平均高于減毒子孢子免疫的小鼠。核酸免疫小鼠用5×105子孢子進(jìn)行攻擊感染，結(jié)果肝期寄生蟲的負(fù)荷可減少86%；而以102子孢子攻擊感染經(jīng)過2－3次核酸免疫的動(dòng)物，發(fā)現(xiàn)核酸疫苗對(duì)68%（18/28）的小鼠具有保護(hù)作用，并且這種保護(hù)作用依賴D8+T細(xì)胞。盡管PyCSP質(zhì)粒DNA免疫BALB/c小鼠可以劑量依賴形式誘導(dǎo)出高水平的CSP特異性抗體，且比減毒子孢子免疫鼠抗體水平高10－15倍，然而通過體外檢測(cè)抗體對(duì)子孢子侵入肝期的寄生蟲生長(zhǎng)發(fā)育的抑制作用，發(fā)現(xiàn)該DNA疫苗誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答只有中等水平的生物學(xué)活性。提示，上述DNAU疫苗的保護(hù)作用主要依賴于CTL介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。說明核酸免疫可用于抗瘧原蟲感染。PyCSP質(zhì)粒DNA免疫可誘導(dǎo)針對(duì)PyCSP的一種已被鑒定但尚未命名的CTL抗原特異性表位、MHC限制的CD8+CTL，且CTL應(yīng)答與抗體應(yīng)答呈相關(guān)關(guān)系。PyCSPdNA免疫誘導(dǎo)的CTL的水平（70%－80%特異性溶解靶細(xì)胞）明顯高于射線減毒子孢子（20%－30%特異性溶解靶細(xì)胞）免疫誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫水平。Hoffman等[7]同樣構(gòu)建了可編碼PyCSP基因的重組質(zhì)粒進(jìn)行動(dòng)物免疫試驗(yàn)，獲得了與Sedegah等[8]報(bào)道相似的免疫效果。同時(shí)他們還發(fā)現(xiàn)，免疫注射3次（20-40μg/次）質(zhì)粒DNA可達(dá)到與每次注射200μg相同的保護(hù)性免疫效應(yīng)，而且延長(zhǎng)免疫間隔期似處可增強(qiáng)免疫效應(yīng)。

　　許多研究表明，MHC和非MHC基因可調(diào)控小鼠對(duì)約氏瘧原蟲感染的保護(hù)作用，而且針對(duì)惡性瘧原蟲（P.falciparum）、間日瘧原蟲（P.vivax）、約氏瘧原蟲及伯氏瘧原蟲（P.berghei）的CD8+和CD4+T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的免疫應(yīng)答均受遺傳基因的限制。因此，為考察DNA疫苗在P.yoelii鼠模型中的保護(hù)效果，Doolan等[8]利用能編碼PyCSP的質(zhì)粒DNA免疫5株近交系小鼠，它們的遺傳背景和H-2單倍型分別為BALB/c（H-2d）、A/J（H-2a）、B10.BR（H-2k）、B10.Q（H-2q）及C57BL/c（H-2b）。同時(shí)還免疫了另一株遠(yuǎn)交系小鼠CD-1.結(jié)果只有BALB/c（H-2d）小鼠獲得高效免疫，其抵抗攻擊感染的保護(hù)率為75%.

　　1.2肝細(xì)胞紅細(xì)胞蛋白DNA疫苗

　　用單克降抗體NYLS3（NYLS3-McAb）在約氏瘧原蟲感染的肝細(xì)胞和紅細(xì)胞的納蟲泡膜上可鑒定出一種17kDa的蛋白抗原，這種抗原被命名為肝細(xì)胞紅細(xì)胞蛋白（PyHEP17），它也是保護(hù)性免疫應(yīng)答的靶抗原[9].NYLS3-McAb可以特異地消滅培養(yǎng)的肝期寄生蟲。在體內(nèi)，被動(dòng)轉(zhuǎn)移NYLS3-McAb給未感染動(dòng)物，可以降低原蟲血癥的蟲體數(shù)量。Doolan等[8]用肝內(nèi)及無性血液期均表達(dá)PyHEP17的cDNA構(gòu)建的質(zhì)粒DNA作為疫免疫小鼠，結(jié)果可保護(hù)5株近交系中的3株，其單倍型及保護(hù)率分別為H-2a，71%；H-2k，54%；H-2d，26%，而且B10.BR小鼠（H-2a）則僅有17%的保護(hù)率，C57BL/c（H-2b）則不能保護(hù)攻擊感染。遠(yuǎn)交系小鼠CD-1則表現(xiàn)出40%－50%的保護(hù)率。但PyHEP17質(zhì)粒DNA免疫并不能保護(hù)小鼠對(duì)血液期瘧原蟲的攻擊感染。核酸免疫可在BALB/c小鼠中誘導(dǎo)出抗原特異、MHC限制的CD8+CTL，而A/J或B10.BR則檢測(cè)不到CTL.與PyCSP質(zhì)粒DNA免疫不同的是，PyHEP17質(zhì)粒DNA免疫鼠誘導(dǎo)的CTL與抗體產(chǎn)量并不呈相關(guān)關(guān)系，因?yàn)樵谒械?株小鼠中幾乎檢測(cè)不到抗體的產(chǎn)生。

　　1.3核酸疫苗的基因調(diào)控

　　上述研究結(jié)果表明，PyCSP或PyHEP17質(zhì)粒DNA免疫誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫作用受基因調(diào)控，且早期的研究證明免疫應(yīng)答也受基因調(diào)控。提示，針對(duì)瘧疾的單一效價(jià)疫苗無法保護(hù)遺傳背景復(fù)雜的遠(yuǎn)交系動(dòng)物和人類；即使在近交系小鼠中，PyCSP和PyHEP17質(zhì)粒DNA的免疫效果也表現(xiàn)出遺傳限制的不同保護(hù)模式。Doolan等[8]試用上述兩種質(zhì)粒DNA（PyCSP和PyHEP17）的混合物免疫接種，以確定這種遺傳限制的免疫保護(hù)模式是否可被二價(jià)DNA疫苗所阻斷。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在B10.BR小鼠中，單價(jià)PyCSP或PyHEP17質(zhì)粒DNA免疫后的保護(hù)分別為8%和54%，而兩者的混合物同時(shí)免疫則可誘導(dǎo)85%的保護(hù)率，在BALB/c和A/J兩株小鼠中，經(jīng)二價(jià)疫苗免疫后也表現(xiàn)出明顯升高的保護(hù)率（80%－90%），則另外兩株小鼠則未能完全保護(hù)，從而導(dǎo)致了瘧原蟲血癥的發(fā)生，但其出現(xiàn)時(shí)間與對(duì)照組相比推遲了4天，與其90%的感染肝細(xì)胞被消滅相一致。因此，二價(jià)DNA疫苗可保護(hù)不同遺傳背景和H-2單倍型的小鼠，并在B10.BR小鼠中，這種保護(hù)作用呈現(xiàn)疊加效應(yīng)。這些結(jié)果提示，小鼠對(duì)核酸疫苗誘發(fā)的免疫應(yīng)答受基因調(diào)控，單一效價(jià)的疫苗似乎很難對(duì)不同遺傳背景的個(gè)體提供完全的保護(hù)作用，而二價(jià)的DNA疫苗則可以保護(hù)不同遺傳背景及H-2單倍型的小鼠，同樣也只有二價(jià)或多價(jià)的核酸疫苗方可保護(hù)遺傳背景更復(fù)雜的人類。同時(shí)本試驗(yàn)結(jié)果還表明，可用與PyHEP17同源的惡性瘧原蟲基因構(gòu)建質(zhì)粒DNA以進(jìn)行人體惡性瘧原蟲的免疫研究。

　　1.4裂殖子表面蛋白DNA疫苗

　　約氏瘧原蟲裂殖子表面蛋白1抗原（PyMSP-1）首先被合成為一種大分子量的前體（190-230kDa，分子量大小與寄生蟲種株不同有關(guān)），隨后被分解成4個(gè)片段[10].大量的證據(jù)表明，在鼠類和靈長(zhǎng)類瘧疾模型中，PyMSP-1也是一種保護(hù)性應(yīng)答（主要為抗體介導(dǎo)的）靶抗原。Kang等[11]將編碼PyMSP-1c端片段（PyC2）與GST融合蛋白（GST-PyC2）的基因構(gòu)建成一種質(zhì)粒DNA疫苗（V3），將V3免疫BLAB/c小鼠，可成功地誘導(dǎo)產(chǎn)生抗PyC2抗體。這些抗體可免疫沉淀天然的pyMSP-1蛋白并可與McAb302（針對(duì)PyC2的McAb）競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合PyMSP-1的表位，這種競(jìng)爭(zhēng)作用與GST-PyC2蛋白免疫誘發(fā)的抗體相似。但是，與GST-PyC2蛋白免疫產(chǎn)生的抗體相比，這些抗體的滴度及親和力較低，而抗體的同種型構(gòu)成和抵抗紅內(nèi)期寄生蟲的致死性攻擊的保護(hù)能力也不相同。與蛋白免疫相比，在DNA免疫過程中，GST或PyC2特異的IgG抗體的親和力也未見明顯的增強(qiáng)。這些結(jié)果提示，在本試驗(yàn)系統(tǒng)中，DNA免疫期間可能幾乎不存在成熟的特異性抗體親和力。

　　2伯氏瘧原蟲的DNA疫苗

　　Leitner等[12]用兩個(gè)表達(dá)伯氏瘧原蟲CSP（PbCSP）水平不同的質(zhì)粒DNA分別經(jīng)表皮或肌肉免疫注射BALB/c小鼠，結(jié)果表明，延長(zhǎng)免疫間隔時(shí)間不僅可使抗體的產(chǎn)量增加，而且可增強(qiáng)免疫保護(hù)作用。而在經(jīng)表皮注射的動(dòng)物中，發(fā)現(xiàn)該質(zhì)粒DNA還可促進(jìn)CSP特異性IgG同種型IgG1和IgG2a轉(zhuǎn)換，最終兩者達(dá)到平衡。用基因槍法將高表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)表皮3次免疫動(dòng)物，每次間隔6周，結(jié)果誘導(dǎo)出強(qiáng)烈的體液免疫應(yīng)答及高水平的保護(hù)作用。Gramzinski等[13]用編碼用PyCSP的質(zhì)粒DNA免疫夜猴以進(jìn)行優(yōu)化抗體應(yīng)答方面的研究，結(jié)果表明，經(jīng)皮內(nèi)途徑免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體應(yīng)答水平與多種抗原肽/佐劑疫苗相似。因此，在夜猴模型中，可應(yīng)用皮內(nèi)注射途徑進(jìn)行DNA疫苗的初期研究。同時(shí)也表明，該途徑適合于誘導(dǎo)針對(duì)惡性瘧原蟲抗原的保護(hù)性應(yīng)答的DNA疫苗研究。

　　3惡性瘧原蟲的核酸疫苗

　　惡性瘧原蟲子孢子表面蛋白2（PfSSP-2）是一種表達(dá)于子孢子及紅外期瘧原蟲膜表面的抗原，也是保護(hù)性免疫應(yīng)答的一種靶抗原。在體內(nèi)，過繼轉(zhuǎn)移PfSSP-2特異的CD8+T細(xì)胞可傳遞對(duì)攻擊感染的保護(hù)作用。用表達(dá)PfSSP-2的肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞被動(dòng)轉(zhuǎn)移也可傳遞來自CD8+T細(xì)胞的保護(hù)作用[14].

　　Wang等[15]將分別編碼惡性瘧原蟲PICSP、子孢子表面蛋白-2（PfSSP2）、紅外期蛋白（PfEXP2）及肝期蛋白-1（PfLSA1）基因的質(zhì)粒DNA混合物或編碼單一蛋白基因的質(zhì)粒DNA肌肉注射免疫恒河猴。如果，PfCSP質(zhì)粒DNA免疫的所有6只猴、PfSSP2質(zhì)粒DNA免疫的9只猴中的7只、PfEXP2或PfLSA1質(zhì)粒DNA免疫的6只猴中的5只，它們的外周血單核細(xì)胞（PBMC）在體外經(jīng)抗原刺激均可檢測(cè)到抗原特異的CTL，且CTL活性受遺傳限制，并依賴于CD8+T細(xì)胞。本研究首次證明了質(zhì)粒DNA混合物免疫的靈長(zhǎng)類可誘導(dǎo)出針對(duì)混合物中所有組分的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答，可為人類的多核酸免疫提供基礎(chǔ)資料。

　　Butler等[16]報(bào)道了一項(xiàng)臨床試驗(yàn)，用瘧原蟲CSP基因構(gòu)建的核酸疫苗與佐劑QS21混合，接種免疫志愿者，結(jié)果7名經(jīng)感染有瘧原蟲的蚊反復(fù)叮咬的志愿者中，有6人獲得了保護(hù)，證實(shí)了核酸疫苗的免疫保護(hù)效果。

　　Wang等[17]用編碼瘧原蟲抗原蛋白的質(zhì)粒DNA免疫注射瘧原蟲未感染的志愿者，結(jié)果表明，該疫苗可誘導(dǎo)出抗原特異的、基因限制的CD8+依賴的CTLs，且這種免疫應(yīng)答受6個(gè)HLA1型等位基因的限制。本研究首次證明DNA疫苗可誘導(dǎo)未感染健康人產(chǎn)生CD8+CTLs.同時(shí)也證明在同一個(gè)體中，CTLs受多個(gè)HLA等位基因限制。這些證據(jù)將為這種革命性疫苗技術(shù)用于人體的進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)資料。

　　4優(yōu)化瘧疾DNA疫苗的策略

　　4.1優(yōu)化免疫方案

　　核酸疫苗在誘導(dǎo)體液應(yīng)答、CTL應(yīng)答及保護(hù)作用的免疫途徑、劑量、次數(shù)及其間隔等仍未得到解決，但它們都可能影響核酸疫苗的免疫效果。正如Sedegah等[6]在PyCSPdNA疫苗免疫的試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)抗體的應(yīng)答水平大約與質(zhì)粒DNA劑量成正比，而且PyCSP質(zhì)粒DNA疫苗經(jīng)2－3次免疫（間隔2－3周）可誘導(dǎo)出對(duì)子孢子攻擊感染的保護(hù)作用，若再進(jìn)行第四次免疫，結(jié)果可引起Th1型免疫應(yīng)答向Th2型免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化。除上述影響因素外，研究還發(fā)現(xiàn)動(dòng)物的發(fā)育程度也能影響疫苗的效果。Mor等[18]將具有保護(hù)作用的質(zhì)粒DNA[6]用來免疫2－5日齡小鼠，發(fā)現(xiàn)它們不僅不能誘導(dǎo)免疫效應(yīng)，反而誘導(dǎo)了免疫耐受。這種新生期免疫耐受的動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)DNA疫苗再次免疫無法誘導(dǎo)出抗體、細(xì)胞因子或細(xì)胞毒應(yīng)答。這種耐受特異針對(duì)由核酸疫苗編碼表達(dá)的內(nèi)源性抗原的免疫原表位，而經(jīng)外源CSP免疫的小鼠可產(chǎn)生針對(duì)不同表位的抗體，而不發(fā)生免疫耐受。這些結(jié)果表明，與傳統(tǒng)的蛋白免疫原相比，DNA疫苗誘發(fā)的免疫應(yīng)答在性質(zhì)、特異性方面有著明顯的差異。

　　4.2改善DNA疫苗的載體

　　DNA疫苗研究的最終目的在于利用它來保護(hù)人體以抵抗瘧原蟲感染，因此安全性顯得非常重要。為避免外源基因整合進(jìn)人體細(xì)胞染色體中，研究人員在構(gòu)建載體時(shí)將一些病毒DNA序列如SV40的復(fù)制起始點(diǎn)剔除掉。同時(shí)也可插入一些有利于靶抗原基因表達(dá)的序列，如Haddad等[19]構(gòu)建了可編碼瘧疾抗原Pf322的質(zhì)粒DNA，同進(jìn)在此質(zhì)粒DNA中編碼靶抗原基因的前方插入人體組織纖溶酶激活物（tPA）信號(hào)序列。首先在體外分別用含有或缺乏tPA信號(hào)序列的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞，并用布雷菲爾德菌素A處理轉(zhuǎn)染子。結(jié)果表明，只有編碼有信號(hào)肽的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞通過質(zhì)內(nèi)網(wǎng)和Golgi體通路分泌靶抗原。分別用這種質(zhì)粒重復(fù)肌肉注射小鼠，結(jié)果誘發(fā)的針對(duì)靶抗原的抗體應(yīng)答在動(dòng)力學(xué)、特異性IgG水平及持續(xù)時(shí)間上都有明顯的區(qū)別，這些結(jié)果提示，這兩種質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染肌肉細(xì)胞產(chǎn)生的B細(xì)胞可識(shí)別及抗原提呈細(xì)胞（APC）可攝取的靶抗原水平也明顯不同。

　　4.3修飾抗原序列以改變抗原表達(dá)的定位及免疫原性

　　改變DNA疫苗抗原表達(dá)的定位可用于改變?cè)摽乖拿庖咴浴，F(xiàn)代免疫學(xué)研究已經(jīng)證明，非分泌性抗原必須通過MHCⅠ類途徑優(yōu)先處理和提呈才能激發(fā)CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，而分泌性抗原只能通過促進(jìn)APC攝取以及MHCⅡ類途徑提呈從而誘發(fā)體液應(yīng)答。另外，也可通過改變抗原的氨基酸序列改變抗原免疫原性[20].

　　4.4免疫應(yīng)答的改變

　　優(yōu)化免疫應(yīng)答可通過如下方法進(jìn)行，應(yīng)用編碼有細(xì)胞因子或協(xié)同刺激因子的質(zhì)粒來調(diào)控免疫應(yīng)答。Weiss等[21]分別構(gòu)建了編碼PyCSP基因的質(zhì)粒DNA——PyCSP1012和鼠CM-CSF基因的質(zhì)粒DNA.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)以PyCSP1012免疫小鼠，其保護(hù)率為28%；與GM-CSF質(zhì)粒DNA同時(shí)免疫則保護(hù)率可提高到58%；與編碼無活性的GM-CSF的質(zhì)粒DNA同時(shí)免疫則不能提高其保護(hù)性；而GM-CSF質(zhì)粒DNA單獨(dú)免疫也沒有保護(hù)性。GM-CSF質(zhì)粒DNA在PyCSP1012免疫中的免疫促進(jìn)作用表現(xiàn)為，它可提高PyCSP的IgG1、IgG2a及IgG2b的產(chǎn)量，而不能促進(jìn)IgG3或IgM的產(chǎn)生；同時(shí)它也可增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞針對(duì)PyCSP280－288aa表位的IFN-γ應(yīng)答增強(qiáng)，但CTL活性沒有發(fā)生變化。最引人注目的是，PyCSP1012質(zhì)粒DNA和GM-CSF質(zhì)粒DNA同時(shí)免疫可提高抗原特異的IL-2的產(chǎn)量，并促進(jìn)抗原特異CD4+T細(xì)胞的增生，提示GM-CSF質(zhì)粒DNA可能作用于樹突狀細(xì)胞進(jìn)而促進(jìn)PyCSP抗原的提呈，然后IL-2產(chǎn)量的增加及CD4+T細(xì)胞活性增強(qiáng)促進(jìn)了抗體和CD8+T細(xì)胞的功能。重組GM-CSF已應(yīng)用于人體的臨床治療，因而GM-CSF蛋白或其質(zhì)粒DNA可用作DNA免疫的一種增強(qiáng)劑。

　　5結(jié)語

　　DNA免疫技術(shù)為瘧疾疫苗的研制開拓了一條前所未有的新途徑。自此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于瘧疾核酸疫苗的研制后，在短短的幾年間，已有多種DNA疫苗使用于動(dòng)物模型的研究，并可誘導(dǎo)出CD8+T細(xì)胞應(yīng)答。研究表明，用二價(jià)DNA疫苗或多價(jià)疫苗或多種單價(jià)疫苗聯(lián)合免疫有可能克服遠(yuǎn)交系動(dòng)物因遺傳背景而限制的免疫應(yīng)答。盡管如此，在設(shè)計(jì)與構(gòu)建能誘導(dǎo)保護(hù)性免疫應(yīng)答的核酸疫苗方面尚存在許多問題。從瘧疾基因組計(jì)劃[22]可獲得許多基因的信息，并很快在DNA疫苗研制中得到了應(yīng)用。另外，應(yīng)用基因技術(shù)可從基因庫(kù)中鑒定并篩選出可編碼保護(hù)性抗原的基因[23]，也將有利于瘧疾疫苗的研制。

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