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柱色譜法工作原理

2012-03-28 16:56 醫(yī)學教育網(wǎng)
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分析化學執(zhí)業(yè)藥師考試各科目的基礎學科,柱色譜在中藥成分的分析鑒別中有很大的作用,在實際的工業(yè)生產(chǎn)中也經(jīng)常用到,希望大家在有時間的基礎上掌握。

所用色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內(nèi)裝有吸附劑。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時的流速,均按各單體中的規(guī)定。吸附劑的顆粒應盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果,除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0.07-0.15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響,應予注意。

吸附劑的填裝干法:將吸附劑一次加入色譜管,振動管壁使其均勻下沉,然后沿管壁緩緩加入開始層析時使用的流動相,或?qū)⑸V管下端出口加活塞,加入適量的流動相,旋開活使流動相緩緩滴出,然后自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤濕下沉,在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。濕法:將吸附劑與流動相混合,攪拌以除去空氣泡,徐徐傾入色譜管中,然后再加入流動相,將附著于管壁的吸附劑洗下,使色譜柱表面平整。

俟填裝吸附劑所用流動相從色譜柱自然流下,液面將柱表面相平時,即加試樣溶液。

試樣的加入除另有規(guī)定外,將試樣溶于層析時使用的流動相中,再沿色譜管壁緩緩加入。注意勿使吸附劑翻起?;?qū)⒃嚇尤苡谶m當?shù)娜軇┲小Ec少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發(fā)去盡后使呈松散狀;將混有試樣的吸附劑加在已制備好的色譜柱上面。如試樣在常用溶劑中不溶解,可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。

洗脫除另有規(guī)定外,通常按流動相洗脫能力大小,遞增變換流動相的品種和比例,分別分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時,再改變流動相的品種和比例。操作過程中應保持有充分的流動相留在吸附層的上面。

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