麻疹病毒IgM抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作過(guò)程

2012-04-09 15:11 來(lái)源：

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[前言]

麻疹是由麻疹病毒引起的急性呼吸道傳染病。好發(fā)于冬春季，6個(gè)月至5歲兒童發(fā)病率最高，近年來(lái)由于疫苗免疫的結(jié)果，麻疹流行強(qiáng)度減弱，發(fā)病年齡后移。病毒可通過(guò)空氣飛沫傳播。易感者接觸麻疹病毒，90%發(fā)病，所以傳染性強(qiáng)，。病人是唯一的傳染源。自出疹前2天至出疹后5天，傳染性最強(qiáng)。任何人都容易感染，尤其兒童最多見(jiàn)，隱性感染率低。病毒先侵入眼、呼吸道，并在局部粘膜增殖，少量入血。然后隨血流侵入全身淋巴組織和單核吞噬系統(tǒng)，并在其內(nèi)大量增殖，再次入血，即第二次病情血癥，出現(xiàn)高熱和出疹，病毒血癥持續(xù)至出疹后第2天。全身性遲發(fā)型超敏性細(xì)胞免疫反應(yīng)。免疫性損害造成組織壞死和炎性反應(yīng)。可見(jiàn)皮疹，由于真皮腫脹，增生皮疹鼓出，突出于皮面，為充血性的。有單核細(xì)胞炎癥浸潤(rùn)，紅細(xì)胞崩解，血漿滲出。所以皮疹有色素沉著，表皮細(xì)胞壞死、脫屑。還可見(jiàn)柯氏斑，是粘膜下的細(xì)胞變性，壞死，多核巨細(xì)胞變引起的，呈白點(diǎn)狀。病毒侵襲任何組織時(shí)均出現(xiàn)多核巨細(xì)胞。呼吸道病變最嚴(yán)重，可并發(fā)麻疹腦炎。麻疹病毒可干擾人體非特異性免疫力，干擾被結(jié)核菌素致敏的淋巴細(xì)胞敏感性，但極易繼發(fā)細(xì)菌感染。麻疹的潛伏期6—18天，發(fā)病突然。

[原理]

本試劑盒先用吸收液去除IgG，再檢測(cè)人血清或血漿中的抗-HSV-Ⅱ？IgM，消除假陰性。具有簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)。

[試劑廠家]

深圳市綠瀚生物技術(shù)有限公司[試劑盒組成] 1、包被板條2、定標(biāo)液3、陰陽(yáng)對(duì)照血清4、酶結(jié)合物5、底物6、顯色液7，終止液8，洗滌液9，吸收液[試劑的穩(wěn)定性與貯存]試劑自生產(chǎn)日起避光貯存于2-8℃，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

[標(biāo)本的收集與處理]

標(biāo)本為無(wú)溶血血清。

[操作步驟]

1，樣本稀釋?zhuān)河醚逑♂屢?：41稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清，取稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清150ul于另一管中，加吸收液150ul，徹底混勻，室溫（21-25℃）靜置20+/-5分鐘。

2，加樣：取包被板，加入吸收稀釋定標(biāo)液、質(zhì)控、血清樣本各100ul.并設(shè)空白對(duì)照一孔，室溫（21-25℃）靜置20+/-2分鐘。甩去，加洗滌液一滴，蒸餾水洗滌5次，拍干。

3，反應(yīng)：加酶結(jié)合物100ul，室溫（21-25℃）靜置20+/-2分鐘。甩去，每孔加洗滌液一滴，蒸餾水洗滌5次，拍干。

4，顯色：每孔加底物和顯色液各100ul，室溫（21-25℃）靜置10+/-2分鐘。以陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)明顯藍(lán)色為準(zhǔn)。

[結(jié)果判定]

1、目測(cè)法：在白色背景下觀察各孔顏色，明顯蘭色為陽(yáng)性，無(wú)色或極淡蘭色為陰性。

2、酶標(biāo)儀檢測(cè)（選擇波長(zhǎng)450nm）：每孔加終止液一滴，用空白孔校零，測(cè)定各孔OD值。

臨界值（C.O.）=2.1×陰性對(duì)照OD值

（1）樣本OD值S/C.O.≥1.0判為陽(yáng)性；