硅膠照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(75:25)為流動相；檢測波長為254nm。取溴醋己烷雌酚對照品約10mg，加氯仿50ml使溶解，在暗處放置不少于5小時，量取5.0ml，揮干氯仿，殘?jiān)ㄒ严┐品拥捻樖襟w和反式體）加乙醇-水(1:1)25ml使溶解，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，已烯雌酚反式體峰與順式體峰的相對保留時間分別為1:1.33。

理論板數(shù)按已烯雌酚反式體峰計(jì)算應(yīng)不低于1000，溴醋己烷雌酚反式體峰與順式體峰的分離度應(yīng)大于3.0。測定法取溴醋己烷雌酚對照品適量，精密稱定，加乙醇-水(1:1)溶解并稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量，同法測定，按外標(biāo)法以已烯雌酚反式體峰面積和順式體峰面積的總和（已烯雌酚順式體峰的面積與1.26相乘）計(jì)算，即得。