方法名稱： 維生素K₁的測定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定維生素K1的含量。

本方法適用維生素K₁。

方法原理： 供試品和內(nèi)標(biāo)均制成流動相溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測維生素K1（C31H46O2）和內(nèi)標(biāo)鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑： 1.石油醚

2. 正己烷

儀器設(shè)備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，維生素K1的順、反式異構(gòu)體之間及順式異構(gòu)體峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：正己烷+石油醚=2.5 2000

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 稱取供試品

取本品20mg，精密稱定，置50mL量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取維生素K1對照品適量，與供試品同法配制。

3. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

取苯甲酸膽甾酯37.5mg，置25mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，即得。

4. 供試品溶液的制備

上述供試品加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5mL與內(nèi)標(biāo)溶液各1mL，置10mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定維生素K1和內(nèi)標(biāo)苯甲酸膽甾酯的吸收值，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p676。