方法名稱： 注射用亞葉酸鈣－亞葉酸鈣－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定注射用亞葉酸鈣中亞葉酸鈣的含量。

本方法適用于注射用亞葉酸鈣。

方法原理： 供試品加水溶解并定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長280nm處檢測亞葉酸鈣的峰面積，計算出其含量。

試劑：

1. 甲醇

2. 含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液

取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.8。

儀器設(shè)備：

1.儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按亞葉酸鈣峰計算應(yīng)不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測器

2.色譜條件

2.1 流動相：甲醇 含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液=22 78

2.3 柱溫：40℃

試樣制備：

1.含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液

取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.8。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取亞葉酸鈣對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

取供試品10瓶（3mg、5mg規(guī)格）或5瓶（25mg、30mg、50mg、100mg規(guī)格），加水使內(nèi)容物溶解并定量轉(zhuǎn)移稀釋成每1mL中約0.1mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長280nm處測定亞葉酸鈣的峰面積，計算出其含量，并將結(jié)果乘以0.9256。