方法名稱：

復(fù)方甘草片—嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

該方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草片中嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的含量。

該方法適用于復(fù)方甘草片。

方法原理：

供試品經(jīng)固相萃取柱分離后，收集的部分進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)220nm處檢測(cè)嗎啡、罌栗果提取物和罌栗果提取物粉的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 乙腈

2. 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液

3. 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液

4. 甲醇

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按嗎啡計(jì)算不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液 乙腈=5 5 2

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

2.3 柱溫：室溫

3. 固相萃取柱：用十八烷基硅烷健合硅膠為填充物。

試樣制備：

1. 稱取供試品

嗎啡：取該品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取約10片的量。

罌栗果提取物：取該品約10g，研成粗粉（過(guò)80目篩），精密稱取1g，置200mL量瓶中。

2. 對(duì)照品溶液的制備

嗎啡：精密稱取嗎啡對(duì)照品適量，用含有2%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.01 mg的溶液。

罌栗果提取物：取嗎啡對(duì)照品適量，精密稱定，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.05 mg的溶液。

罌栗果提取物粉：精密稱取嗎啡、磷酸可待因?qū)φ掌愤m量，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL約含嗎啡0.05mg和磷酸可待因0.025mg的溶液。

3. 供試品溶液的制備

嗎啡：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品置磨口錐形瓶中超聲處理5分鐘，精密加稀鹽酸（6→10）10mL，搖勻，超聲處理20分鐘使嗎啡溶解，取出，放置室溫，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液1.0mL，至上述固相柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值約為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預(yù)先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），搖勻，待溶劑滴盡后，用水20mL沖洗，用含2%甲醇的5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

罌栗果提取物和罌栗果提取物粉：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品加5%醋酸溶液適量，超聲處理30分鐘使嗎啡溶解，取出，放置室溫，用5%醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液0.5mL，至上述固相柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值約為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預(yù)先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），搖勻，待溶劑滴盡后，用水20mL沖洗，用含10%甲醇的5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)220nm處測(cè)定嗎啡的吸收值，計(jì)算出其含量。