1.觀察中藥復(fù)方小金丹對人肝癌細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因表達(dá)的影響 方法:制備小金丹含藥血清,用不同濃度的小金丹含藥血清處理人SMMC-7721細(xì)胞。采用基因芯片技術(shù)檢測小金丹含藥血清處理后人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因表達(dá)變化。結(jié)果小金丹處理SMMC-7721細(xì)胞后,所檢測的96個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因中,有77個(gè)基因的表達(dá)出現(xiàn)顯著上調(diào)或下調(diào)(比值〈0.5或〉2.0)。劑量不同,其影響的基因種類和程度也有所不同。結(jié)論小金丹可顯著影響人肝癌細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的表達(dá)。
2.中藥復(fù)方小金丹的體外抗腫瘤活性 方法:SD大鼠隨機(jī)分組灌胃給藥,采血制備含藥血清,MTT法檢測各組抑瘤率,應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析各組數(shù)據(jù)的差異. 結(jié)果 小金丹可抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的生長,小、中、大劑量組和空白對照組相比差異非常顯著(P<0.01),抑瘤率分別為小劑量組26.11%,中劑量組41.40%,大劑量組29.94%. 結(jié)論 小金丹體外時(shí)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721具有顯著的抑瘤活性.
3.中藥復(fù)方小金丹的體內(nèi)外抗腫瘤活性,并研究其分子生物學(xué)機(jī)制 方法 :清潔級ICR小鼠接種肝癌細(xì)胞株H22,隨機(jī)分組并灌胃給藥,另設(shè)空白對照組。停藥次日取材處死小鼠。剝離并摘取腫瘤組織稱重。計(jì)算腫瘤抑制率。小鼠斷尾采血,檢測血常規(guī)。按照白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)骨髓有核細(xì)胞。中性紅實(shí)驗(yàn)測定腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能,MTT法測NK細(xì)胞殺傷活性。SD大鼠隨機(jī)分組,灌胃給藥,采血制備含藥血清。MTT法檢測各組抑瘤率。腫瘤信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因芯片檢測復(fù)方小金丹對96個(gè)基因表達(dá)的影響。應(yīng)用spss統(tǒng)計(jì)軟件分析各組數(shù)據(jù)的差異。 結(jié)果 1 小金丹抑制小鼠肝癌細(xì)胞H22生長,小金丹小、中、大劑量組和荷瘤空白對照組相比,差異非常顯著(P<0.01)。抑瘤率分別為:小劑量組31.79%,中劑量組50.29%,大劑量組46.24%; 2 小金丹對5-FU具有增效作用,5-FU+小劑量組、5-FU+中劑量組、5-FU+大劑量組和單純5-FU組相比,差異非常顯著(P<0.01),各組抑瘤率分別為:5-FU組49.41%,5-FU+小劑量組63.53%,5-FU+中劑量組56.47%,5-FU+大劑量組55.88%。 小金丹對5-FU具有減毒作用,5-FU+小劑量組、5-FU+中劑量組、5-FU+大劑量組和單純5-FU組相比,WBC計(jì)數(shù)、HB含量PLC計(jì)數(shù)和骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù),差異非常顯著(P<0.01); 3 小金丹提高免疫功能,小、中、大劑量組和荷瘤對照組相比NK細(xì)胞殺傷活性、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能,差異非常顯著(P<0.01); 4 小金丹抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長,小、中、大劑量組和空白對照組相比差異非常顯著(P<0.01),抑瘤率分別為小劑量組26.11%,中劑量組41.40%,大劑量組29.94%。 5 小金丹大、中、小劑量對81個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的表達(dá)具有顯著性調(diào)節(jié)作用(比值2.0)。