
方法:補體依賴的微量細胞毒試驗(CDC)。分型抗原:SD抗原,包括HLA-A、B、C、DR、DQ.
(一)原理
標準血清+淋巴細胞,形成抗原抗體復合物,加入補體,在補體的作用下,細胞被溶解。溶解的細胞可被加入的染料(臺盼藍、伊紅)著染,即為陽性反應,計數(shù)死細胞數(shù),作出結(jié)果判斷。
(二)技術要點
1.CDC試驗的關鍵在于獲得標準抗血清,與AB0血型抗體不同,主要獲自經(jīng)產(chǎn)婦。
2.抗血清種類應覆蓋本民族、本地區(qū)80%以上的抗原醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理。
3.Ⅱ類抗原,僅分布于B細胞或巨噬細胞表面,故檢測Ⅱ類抗原應分純B細胞。
4.注意下列假象:①粒細胞和單核細胞能夠非特異性地,吞噬染料而造成著染假象,應注意細胞形態(tài)的區(qū)別。②血小板與淋巴細胞競爭,結(jié)合HLA抗體而導致假陰性結(jié)果,可用玻璃珠脫纖維抗凝。③紅細胞沾染易致假陽性。④單克隆抗體復合物不能激活補體,不能用于CDC,可改用ELISA、FCM.
(三)臨床應用
1.HLA配型可用于器官移植與相關疾病的診斷研究。
2.HLA交叉配型即用CDC法檢測受體血清有無針對供者HLA的抗體,以監(jiān)測排斥反應的發(fā)生或估價受體的敏感性。
3.群體反應性抗體的檢測(PRA)PRA用于判斷器官移植時受體的敏感程度。
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