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直接檢測(cè)病毒抗原

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    1.免疫熒光(IF)技術(shù) 如前所述IF可用于細(xì)胞培養(yǎng)病毒的鑒定,也適用檢測(cè)臨床標(biāo)本中病毒抗原,具有快速、特異的優(yōu)點(diǎn)。直接免疫熒光技術(shù)是用熒光素直接標(biāo)記特異性抗體,檢測(cè)病毒抗原;間接免疫熒光技術(shù)是先用特異性抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合,再用熒光素標(biāo)記的抗體與特異性抗體結(jié)合,從而間接識(shí)別抗原??扇⊙屎砻撀浼?xì)胞,檢測(cè)呼吸道合胞病毒、流感及副流感病毒抗原;取病灶刮片或腦活檢標(biāo)本,檢測(cè)單純皰疹病毒抗原;取尿沉渣檢測(cè)巨細(xì)胞病毒抗原等。近年來使用單克隆抗體大大提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

    2.免疫酶法(IEA)原理與應(yīng)用范圍同免疫熒光技術(shù),IEA是用酶(通常是過氧化物酶)取代熒光素標(biāo)記抗體,酶催化底物形成有色產(chǎn)物,在普通光學(xué)顯微鏡下清晰可見,不需熒光顯微鏡,便于推廣使用。

    3.放射免疫測(cè)定法(RIA) 有競(jìng)爭(zhēng)RIA和因相RNA二種方法。競(jìng)急RIA是同位素標(biāo)記的已知抗原與標(biāo)本中未標(biāo)記的待檢抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合特異性抗體的試驗(yàn),將形成的復(fù)合物分離出來,用放射免疫檢測(cè)儀測(cè)定放射活性,同時(shí)與系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較,確定出待檢抗原的濃度。因相RIA是用特異性抗體包被因相以捕獲標(biāo)本中的抗原,然后加入放射性標(biāo)記的特異性抗體與抗原結(jié)合,測(cè)定放射活性,得知抗原的量。RIA是最敏感的方法,已用于測(cè)定糞便中甲肝病毒、輪狀病毒抗原及血液中乙肝病毒抗原。

    4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)先將特異性抗體包被(吸附)到塑料微培板孔中以捕捉標(biāo)本中相應(yīng)抗原,然后加入酶標(biāo)特異性抗體,相應(yīng)抗原被夾在抗體之間,當(dāng)加入酶的底物后顯色,顯色程度直接反映了標(biāo)本中病毒抗原的量。因其敏感性接近RIA,又不接觸放射性物質(zhì),已被多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用。

    此外,對(duì)難以分離培養(yǎng),形態(tài)特殊且病毒數(shù)量較多的標(biāo)本,可用電鏡或免疫電鏡法直接觀察,是一種快速診斷與鑒定病毒的方法,如輪狀病毒、乙肝病毒。

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直播時(shí)間:3月10日 19:30-21:00

主講老師:劉 楝老師

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