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戊型病毒性肝炎診斷及處理原則:
戊型肝炎的病原血清學(xué)診斷試劑目前尚不能在組織培養(yǎng)上獲取供診斷用的病毒抗原、化學(xué)合成抗原肽和cDNA重組抗原。兩者組裝的EIA試劑在檢測抗HEV-IgG時敏感性和特異性相似。
1、化學(xué)合成寡肽抗原:由位于第二讀碼框架3′端的B細胞表位決定簇的42個氨基酸和第三讀碼框架的3′端的33個氨基酸組成,對第一讀碼框架的依賴于RNA的RNA聚合酶區(qū)的部分氨基酸也有合成。此三個讀碼框架中以第二、三讀碼框架為優(yōu)勢表位決定簇,一框架的聚合酶片段較差。
2、CDNA重組抗原:用原核細胞分別表達的第二、三讀碼框架的3′端編碼多肽,證明具有抗原性,可用作組裝診斷試劑盒的抗原材料,將第二、三讀框的B細胞表位決定簇片段嵌合表達可得嵌合多肽,對第二、三讀框都有抗原反應(yīng),并且抗原性較分別表達的肽段強。當前國內(nèi)外檢測戊型肝炎均用EIA.其基本原理是:在聚苯乙烯板孔內(nèi)在堿性條件下包被純化的戊肝抗原,飽和吸附后洗凈未結(jié)合的抗原,加待檢血清標本(1∶20稀釋)洗凈,醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理加入由辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗體(如檢測IgG則加標記的抗人IgG,如檢測IgM型抗體則加抗人μ鏈抗體)如果血清中抗HEV陽性,標記抗體可與抗HEV結(jié)合,溫育,洗凈后加OPD底物顯橙黃色,在492nm波長下光吸收值(OD值)越大表示陽性強度越大,無色則表示陰性反應(yīng)。其陽性判定值各廠家產(chǎn)品均有說明。操作方法及注意事項均有說明,在此不多述。
抗HEV-IgM在疾病的早期出現(xiàn),可作為HEV病原分型診斷的重要判定標準,從初步的臨床檢測結(jié)果看HEV-IgM的反應(yīng)強度低于甲型肝炎,持續(xù)的時間也較短。因此在病人入院時立即采血做1∶50稀釋檢測抗HEV-IgM,最晚不能遲于發(fā)病后半個月,因抗HEV滴度較低,故凡抗HEV-IgM陽性應(yīng)檢測類風(fēng)濕因子,如類風(fēng)濕因子陽性同時抗HEV-IgM陽性時應(yīng)再進一步稀釋血清進行驗證,如抗HEV-IgM仍陽性類風(fēng)濕因子陰性,診斷成立。醫(yī)學(xué)教。育網(wǎng)搜集整理亦可先用抗人IgG與待檢血清預(yù)先中和,仍能檢出IgM則可判為抗HEV-IgM陽性。當前所用的間接IgM檢測法特異性較捕捉法差,有待進一步改進。