探針與分子雜交技術(shù)的概述介紹，為了幫助大家了解，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)小編為您提供匯總：

探針

探針是一小段單鏈DNA或者RNA片段（大約是20到500bp），用于檢測(cè)與其互補(bǔ)的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈，隨后用放射性同位素（通常用磷-32）、螢光染料或者酶（如辣根過氧化物酶）標(biāo)記成為探針。磷-32通常被摻入組成DNA的四種核苷酸之一的磷酸基團(tuán)中，而熒光染料和酶與核酸序列以共價(jià)鍵相連。

當(dāng)將探針與樣品雜交時(shí)，探針和與其互補(bǔ)的核酸（DNA或RNA）序列通過氫鍵緊密相連，隨后，未被雜交的多余探針被洗去。最后，根據(jù)探針的種類，可進(jìn)行放射自顯影、螢光顯微鏡、酶聯(lián)放大等方法來判斷樣品中是否，或者何位置含有被測(cè)序列（即與探針互補(bǔ)的序列）。

分子雜交技術(shù)

分子雜交（molecularhybridization）確定單鏈核酸堿基序列的技術(shù)。其基本原理是待測(cè)單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸（叫做探針）間通過堿基配對(duì)形成可檢出的雙螺旋片段。這種技術(shù)可在DNA與DNA，RNA與RNA，或DNA與RNA之間進(jìn)行，形成DNA-DNA，RNA-RNA或RNA-DNA等不同類型的雜交分子。作為探針的已知DNA或RNA片段一般為30——50核苷酸長(zhǎng)，可用化學(xué)方法合成或者直接利用從特定細(xì)胞中提取的mRNA。探針必須預(yù)先標(biāo)記以便檢出雜交分子。標(biāo)記方法有多種，常用的為同位素標(biāo)記法和生物素標(biāo)記法。雜交方法又可分為液相雜交和固相雜交。

使單鏈DNA或 RNA分子與具有互補(bǔ)堿基的另一DNA或RNA 片斷結(jié)合成雙鏈的技術(shù)。即核酸分子間的雜交。相互雜交的兩種核酸分子間有時(shí)并非完全一致，但必有一定的相關(guān)性。早在1961年有人創(chuàng)建了DNA與RNA間的分子雜交，但至70年代才發(fā)展成基因分析中一種重要的分析技術(shù)，可鑒定基因的特異性。例如可將具有一定已知順序的某基因的 DNA片段，標(biāo)上放射性核素，構(gòu)成核酸探針，將它通過分子雜交與缺陷的基因結(jié)合，產(chǎn)生雜交信號(hào)，從而把缺陷的基因顯示出來，借此可對(duì)許多遺傳性疾病進(jìn)行產(chǎn)前診斷?，F(xiàn)又用核酸分子雜交技術(shù)診斷乙型肝炎，以及研究其他病毒性疾病和癌瘤的基因結(jié)構(gòu)（癌基因）等。

核酸分子雜交的方法并不復(fù)雜。在雜交前先把待分析的DNA加熱或加堿使之變性,分開成單鏈；然后加入放射性核素標(biāo)記的核酸探針,降溫退火,即獲帶有放射性核素標(biāo)記的雙鏈雜交分子。1979年又發(fā)展成轉(zhuǎn)膜雜交，即將電泳分開的核酸片段，經(jīng)過轉(zhuǎn)移電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，進(jìn)行固相雜交反應(yīng)，用放射自顯影檢出之。此即著名的薩瑟恩氏印跡法。

無庸置疑，分子雜交的基礎(chǔ)是兩個(gè)核酸分子間的完全一致，或有一定的相似性或相關(guān)性。若所用的核酸探針的片段較長(zhǎng)(幾百個(gè)核苷酸以上)，可以得到很準(zhǔn)確的鑒定結(jié)果。但若人工合成的寡核苷酸探針片段較短（如20——30個(gè)核苷酸），則難免會(huì)出現(xiàn)準(zhǔn)確性差的假陽性現(xiàn)象。現(xiàn)又有非放射性核素標(biāo)記核酸探針，如以堿性磷酸酶標(biāo)記的酶標(biāo)核酸探針，以及以生物素標(biāo)記的核酸探針等，這必將有助于推動(dòng)分子雜交在臨床醫(yī)學(xué)中的廣泛應(yīng)用。

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