電泳法是藥物分析學(xué)常考知識(shí)點(diǎn)，為了幫助廣大執(zhí)業(yè)藥師考生復(fù)習(xí)，小編為大家整理出如下相關(guān)內(nèi)容！

電泳法介紹：

電泳法，是指帶電荷的供試品（蛋白質(zhì)、核苷酸等）在惰性支持介質(zhì)（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場(chǎng)的作用下，向其對(duì)應(yīng)的電極方向按各自的速度進(jìn)行泳動(dòng)，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，用適宜的檢測(cè)方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計(jì)算其百分含量的方法。

各電泳法，除另有規(guī)定外，照下述方法操作。

一、紙電泳法

1.儀器裝置

包括電泳室及直流電源兩部分。

常用的水平式電泳室裝置如圖，包括兩個(gè)電泳槽A和一個(gè)可以密封的玻璃（或相應(yīng)材料）蓋B；兩側(cè)的電泳槽均用有機(jī)玻璃（或相應(yīng)材料）板C分成兩部分；外格裝有鉑電極（直徑0.5～0.8cm）D；里格為可放濾紙E的有機(jī)玻璃電泳槽架F，此架可從槽中取出；兩側(cè)電泳槽A內(nèi)的鉑電極D經(jīng)隔離導(dǎo)線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連。

電源為具有穩(wěn)壓器的直流電源，常壓電泳一般在100～500V，高壓電泳一般在500～10000V.

2.操作法

（1）電泳緩沖液

枸櫞酸鹽緩沖液（pH3.0）

取枸櫞酸（C6H8O7·H2O）39.04g與枸櫞酸鈉（C6H5Na3O7·2H2O）4.12g，加水4000ml，使溶解。

（2）濾紙

取色譜濾紙置1mol/L甲酸溶液中浸泡過夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4，置60℃烘箱烘干，備用?？砂葱枰贸砷L(zhǎng)27cm、寬18cm的濾紙，或根據(jù)電泳室的大小裁剪，并在距長(zhǎng)度方向一端5～8cm處劃一起始線，每隔2.5～3cm處做一記號(hào)備點(diǎn)樣用。

（3）點(diǎn)樣有濕點(diǎn)法和干點(diǎn)法。濕點(diǎn)法是將裁好的濾紙全部浸入枸櫞酸鹽緩沖液（pH3.0）中，濕潤(rùn)后，取出，用濾紙吸干多余的緩沖液，置電泳槽架上，使起始線靠近陰極端，將濾紙兩端浸入緩沖液中，然后用微量注射器精密點(diǎn)加供試品溶液，每點(diǎn)10μl，共3點(diǎn)，并留2個(gè)空白位置。

干點(diǎn)法是將供試品溶液點(diǎn)于濾紙上，吹干、再點(diǎn)，反復(fù)數(shù)次，直至點(diǎn)完規(guī)定量的供試品溶液，然后用噴霧器將濾紙噴濕，點(diǎn)樣處最后噴濕，本法適用于稀的供試品溶液。

（4）電泳

于電泳槽中加入適量電泳緩沖液，浸沒鉑電極，接通電泳儀穩(wěn)壓電源擋，醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)編輯整理調(diào)整電壓梯度為18～20V/cm，電泳約1小時(shí)45分鐘，取出，立即吹干，置紫外光燈（254nm）下檢視，用鉛筆劃出紫色斑點(diǎn)的位置。

（5）含量測(cè)定

剪下供試品斑點(diǎn)和與斑點(diǎn)位置面積相近的空白濾紙，剪成細(xì)條，分別置試管中，各精密加入0.01mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，放置1小時(shí)，用3號(hào)垂熔玻璃漏斗濾過，也可用自然沉降或離心法傾取上清液，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定測(cè)定吸收度，并按吸收系數(shù)計(jì)算含量。

二、醋酸纖維素薄膜電泳法

1.儀器裝置

電泳室及直流電源同紙電泳。

2.試劑

（1）巴比妥緩沖液（pH8.6）取巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，加水溶解使成1000ml.

（2）氨基黑染色液

取0.5g的氨基黑10B，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。

（3）漂洗液

取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混勻。

（4）透明液

取冰醋酸25ml，加無水乙醇75ml，混勻。

3.操作法

（1）醋酸纖維素薄膜

取醋酸纖維素薄膜，裁成2cm×8cm的膜條，將無光澤面向下，浸入巴比妥緩沖液（pH8.6）中，待完全浸透，取出夾于濾紙中，輕輕吸去多余的緩沖液后，將膜條無光澤面向上，置電泳槽架上，經(jīng)濾紙橋浸入巴比妥緩沖液（pH8.6）中。

（2）點(diǎn)樣與電泳

于膜條上距負(fù)極端2cm處，條狀滴加蛋白含量約5%的供試品溶液2～3μl，在10～12V/cm電位梯度下電泳。電泳區(qū)帶距離以4～5cm為宜。［醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理］

（3）染色

電泳完畢，將膜條取下浸于氨基黑染色液中，2～3分鐘后，用漂洗液浸洗數(shù)次，直至脫去底色為止。

（4）透明

將洗凈并完全干后的膜條浸于透明液中10～15分鐘，取出平鋪于潔凈的玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光度計(jì)上測(cè)定和作標(biāo)本長(zhǎng)期保存。

（5）含量測(cè)定

未經(jīng)透明處理的醋酸纖維素薄膜電泳圖可按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法測(cè)定，一般采用洗脫法或掃描法，測(cè)定各蛋白質(zhì)組分的相對(duì)百分含量。

洗脫法

將洗凈的膜條用濾紙吸干，剪下供試品溶液各電泳圖譜的電泳區(qū)帶，分別浸于1.6%的氫氧化鈉溶液中，振搖數(shù)次，至洗脫完全，于一定波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度。同時(shí)剪取與供試品膜條相應(yīng)的無蛋白部位，同法操作作對(duì)照。先計(jì)算吸收值總和，再計(jì)算各蛋白組分所占百分率。

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