HLA分型

HLA分型

HLA分型并不只是一種應用性的臨床檢測指標，免疫遺傳學研究的發(fā)展，很大程度上依賴于以分型為主要手段的HLA多態(tài)性分析。

一、血清學分型法

血清學分型法，是應用一系列已知抗HLA的特異性標準分型血清與待測淋巴細胞混合，借助補體的生物學作用介導細胞裂解的細胞毒試驗。因分型血清和淋巴細胞用量少，稱為補體依賴的微量細胞毒（CDC）試驗。能夠應用該法檢測的抗原稱為SD抗原，包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DR、HLA-DQ。

二、細胞學分型法

細胞分型法，是以混合淋巴細胞培養(yǎng)（**C）或稱混合淋巴細胞反應（**R）為基本技術(shù)的HLA分型法。能用本法測定的抗原稱為LD抗原，包括HLA-D、HLA-DP。**C又有單向和雙向之分。

（一）單向**C

根據(jù)選用的刺激細胞類型，可將單向**C分為陽性和陰性分型法。

1.陰性分型法

又稱純合子細胞分型法。

2.陽性分型法

陽性分型法又稱預致敏淋巴細胞分型法（PLT）。

HLA-D抗原可用陰性和陽性分型法檢測，HLA-DP抗原只用陽性分型法檢測。

（二）雙向**C

遺傳型不同的兩個個體淋巴細胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導致對方淋巴細胞增殖，故稱雙向**C。

本法不能判斷型別，只能說明供、受體HLA抗原配合程度，雙向**C強度與兩個體間HLA抗原差異成正比，器官或細胞移植時，應選擇**C最弱者為供體。

三、分子生物學分型法

（一）RFLP與PCR-RFLP分型法

限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析，是最早建立的研究HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù)。這種HLA分型法稱為DNA-RFLP。若對DN**段進行體外擴增，然后再用限制性內(nèi)切酶進行酶切分析，可使限制性長度分析的敏感度大大增加，此類引入DNA體外擴增技術(shù)的限制性片段長度多態(tài)性分析則稱為PCR-RFLP分型法。

PCR-RFLP分型法所應用的PCR引物為HLA組特異性的，此法特別適應于小量標本的研究和異基因骨髓移植供者的選擇。

（二）PCR-SSO分型法

序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應（PCR-SSO）是PCR與雜交相結(jié)合的技術(shù)，從而對擴增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。

PCR-SSO是Ⅱ類HLA分型應用最廣泛的方法，能夠鑒定所有已知序列的HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP等位基因。

基因芯片是近年發(fā)展起來的一項新技術(shù)，將其與PCR-SSO結(jié)合應用于HLA分型，可使分型趨于規(guī)?；妥詣踊绕湓贖LA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具優(yōu)勢。

（三）PCR／SSP分型法

該方法應用設計的一套HLA等位基因的序列特異性引物（SSP），對待測DNA進行PCR擴增，從而獲得HLA型別特異性的擴增產(chǎn)物。

（四）PCR-SSCP分型法

單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應（PCR-SSCP），是以待測基因PCR擴增為基礎(chǔ)，對擴增的DNA單鏈（ssDNA）的HLA分型方法。

（五）SBT分型法

基于序列的HLA分型法（SBT），可通過對擴增后的HLA基因片段進行的核酸序列測定判斷HLA型別。

除上述方法外，業(yè)已建立的HLA基因分型技術(shù)還有PCR異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖分析、虛擬DNA分析、嵌合體測定、差異顯示PCR、擴增非變異突變系統(tǒng)或擴增阻滯突變系統(tǒng)（ARMS）等。