外周血單個(gè)核細(xì)胞怎么進(jìn)行分離?
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外周血中單個(gè)核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)的比重介于1.075~1.090 之間,紅細(xì)胞及粒細(xì)胞在1.092左右,血小板在1.030~1.035之間,因而可利用一種比重介于1.075~1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心,使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。
對(duì)分離介質(zhì)的基本要求是:
①基本等滲;
②對(duì)細(xì)胞無毒;
③有特定的比重;
④不溶于血漿及分離物質(zhì)。
Ficoll分離液 (2份6%聚蔗糖蒸餾水溶液與1份34%泛影葡胺生理鹽水溶液混合)為常規(guī)的淋巴細(xì)胞分離液,其比重為1.077 ±0.002,主要用于分離外周血中單個(gè)核細(xì)胞。
密度梯度離心后其分布由上到下依次為:稀釋的血漿層、單個(gè)核細(xì)胞層、粒細(xì)胞層和紅細(xì)胞層。
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