超氧化物歧化酶(SOD)的催化底物是O2 ，一般多以一定時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物生成量或底物的消耗量作為酶活性單位。由于O2 自身很不穩(wěn)定，且不易制備，測定SOD的方法除少數(shù)采用直接法外，一般多為間接法。

1.直接法 原理是根據(jù)O2 或產(chǎn)生O2 的物質(zhì)本身的性質(zhì)測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。經(jīng)典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法(EPR)、核磁共振法。由于所需的儀器設(shè)備價(jià)格昂貴,一般較少應(yīng)用。

2.一般化學(xué)法 這些方法的共同特點(diǎn)是要有一個(gè)O2 的產(chǎn)生體系和一個(gè)被O2 還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 還原或氧化檢測體系的反應(yīng)受到抑制。根據(jù)反應(yīng)受抑制程度，測定SOD的活性。一般化學(xué)法有鄰苯三酚自氧化法、細(xì)胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和堿性二甲亞砜法。

常用的有：

(1) 鄰苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基于經(jīng)典的分光光度法，在堿性條件下，鄰苯三酚自氧化成紅桔酚，用紫外-可見光譜跟蹤波長為325nm、420nm或650nm(經(jīng)典為420nm)，同時(shí)產(chǎn)生O2 ，SOD催化O2 發(fā)生歧化反應(yīng)從而抑制鄰苯三酚的自氧化，樣品對(duì)鄰苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映樣品中的SOD含量。本法具有特異性強(qiáng)，所需樣本量少(僅50μl)，操作快速簡單，重復(fù)性好，靈敏度高，試劑簡單等優(yōu)點(diǎn)。

(2) 細(xì)胞色素C還原法(McCord法)：原理是黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶體系中產(chǎn)生的O2 使一定量的氧化型細(xì)胞色素C還原為還原型細(xì)胞色素C，后者在550nm有最大光吸收。在SOD存在時(shí)，由于一部分O2 被SOD催化而歧化，O2 還原細(xì)胞色素C的反應(yīng)速度則相應(yīng)減少，即其反應(yīng)受到抑制。將抑制反應(yīng)的百分?jǐn)?shù)與SOD濃度作圖可得到抑制曲線，由此計(jì)算樣品中SOD活性。本法是間接法中的經(jīng)典方法，但本法靈敏度較低。

3.化學(xué)發(fā)光法原理是黃嘌呤氧化酶在有氧條件下，催化底物黃嘌呤或次黃嘌呤發(fā)生氧化反應(yīng)生成尿酸，同時(shí)產(chǎn)生O2 。后者可與化學(xué)發(fā)光劑魯米諾反應(yīng)，使其產(chǎn)生激發(fā)。SOD能清除O2 從而抑制魯米諾的化學(xué)發(fā)光。本法可應(yīng)用于SOD的微量測定，不僅靈敏度高，簡便易行，而且特異性與準(zhǔn)確性至少與細(xì)胞色素C還原法類似。

4.免疫學(xué)方法上述方法測定的是SOD活性，免疫學(xué)方法則可測定樣品中SOD的質(zhì)量，因此特異性較好，是較理想的測定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能測定抗體相應(yīng)的抗原，對(duì)于檢測不同種類的SOD，則須制備相應(yīng)的特異性抗體，手續(xù)繁瑣。

5.電泳法電泳染色定位法的基本原理是根據(jù)光化學(xué)法與NBT還原法。電泳則采取垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳。既可采用SOD活性正染色(呈現(xiàn)棕色區(qū)帶)也可采取SOD活性負(fù)染色(呈現(xiàn)無色透明區(qū)帶)。根據(jù)凝膠上電泳分離的SOD區(qū)帶的著色深淺與面積大小，對(duì)樣品進(jìn)行半定量分析，也可制作校正曲線計(jì)算樣品中的SOD含量。染色定位法常用于鑒定SOD，很少為了定量，主要原因是它不及化學(xué)法簡便，但鑒定SOD卻較化學(xué)法為優(yōu)。用電泳法可鑒定SOD是否摻有雜質(zhì)蛋白，有無同工酶，且可半定量地確定SOD的活性大小。

6.平行放在距20 W熒光燈管3 cm處的光照臺(tái)上，光照8 min后，立即在200A分光光度計(jì)的460 nm波長下比色。用測得的結(jié)果計(jì)算樣品中的SOD含量......超氧化物歧化酶（富貴婭娣SOD）——應(yīng)用前景展望 SOD作為一種人體內(nèi)最重要的酶之一，它所起的作用是不可小視的。臨床上可用SOD 治療和預(yù)防下列疾?。杭毙匝装Y和水腫、氧中毒預(yù)防（預(yù)防措施，進(jìn)入高壓氧艙的工作人員，可預(yù)先注射SOD）、氧中毒治療、自身免疫性疾?。?早期治療）、肺氣腫、輻射病及輻射防護(hù)、老年性白內(nèi)障、抗衰老。

SOD是生物體內(nèi)氧自由基的天然清除劑，具有廣泛的醫(yī)用價(jià)值，可作為藥品、食品及日化產(chǎn)品的添加劑。SOD 被批準(zhǔn)用于臨床使用，它對(duì)一些由于年齡、疾病或傷害造成的組織硬化以及纖維化顯示出強(qiáng)大的再生修復(fù)能力。SOD已被成功地應(yīng)用于放療后的輔助治療、控制心臟病人的進(jìn)展、用于治療嚴(yán)重的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在丹麥，有人通過注射SOD 治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。

SOD最有益的應(yīng)用莫過于抗衰老，它可能是真正令我們延長壽命的有力發(fā)現(xiàn)?？茖W(xué)工作者將產(chǎn)生人類SOD 的基因片段SOD 插入果蠅的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，SOD 使果蠅產(chǎn)生了比一般水平更多的果蠅SOD，更重要的是，它們平均壽命增加了40%。

超氧化物歧化酶廣泛應(yīng)用于化妝品添加劑方面，如利用超氧化物歧化酶制造的SOD面膜、SOD 蜜、SOD蛇粉等化妝品，目前已有不下數(shù)百種產(chǎn)品。SOD在皮膚表層可能抑制氧自由基的強(qiáng)氧化作用，達(dá)到護(hù)膚的目的。

SOD 被作為一種補(bǔ)充食物，通過動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，口服SOD 在它發(fā)揮作用之前就已被消化系統(tǒng)破壞了。人們想盡各種可行的辦法使SOD在人體內(nèi)維持較高的水平，即在消耗食物的同時(shí)，提供合適的營養(yǎng)供肝臟合成SOD，或者直接將外源SOD 包裹在食物蛋白質(zhì)中，經(jīng)消化系統(tǒng)而不被消化，進(jìn)入身體其它位置。

SOD在醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域的拓展，取決于對(duì)其作用機(jī)制和生成機(jī)制的更深入研究，期待發(fā)現(xiàn)SOD的促生成因子。由于SOD的來源不同，檢測手段各異，造成SOD活性不具可比性。期待國際通行檢測標(biāo)準(zhǔn)以科學(xué)、簡便、實(shí)用原則規(guī)范化。由于動(dòng)物血SOD在歐盟受阻，大力開發(fā)植物和微生物SOD成為很有前景的產(chǎn)業(yè)方向。

耐熱SOD

耐高溫超氧化物歧化酶（SOD）是國家“十五”、“十一五”863計(jì)劃重大課題項(xiàng)目（課題編號(hào)：2004AA214080，2007AA100604），由中國科學(xué)院國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室采用先進(jìn)技術(shù)，歷時(shí)八年開發(fā)出來的新一代SOD酶產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.生物發(fā)酵提取，無血液病毒及交叉感染危險(xiǎn)；

2.耐熱性強(qiáng)，90℃ 環(huán)境120分鐘酶活幾乎沒有損失，100℃環(huán)境60分鐘酶活保持90%以上；

3.穩(wěn)定性高，在pH4.0—11.0范圍內(nèi)酶活穩(wěn)定，在常溫下保存兩年酶活維持在95%以上；

這樣的SOD酶制劑在世界上獨(dú)一無二；

4.分子量小，容易被吸收；

5.生物利用度高。