自動(dòng)生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、恒溫反應(yīng)、自動(dòng)監(jiān)測(cè)、數(shù)據(jù)處理以及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已經(jīng)成為醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床診斷所必可不少的儀器之一。它的應(yīng)用大大提高了生化檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性、精密度和工作效率，適應(yīng)了臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展對(duì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的要求，然而這一切不僅需要生化分析儀的技術(shù)基礎(chǔ)，也需要儀器內(nèi)每個(gè)項(xiàng)目都有一組最優(yōu)化的分析參數(shù)。并且目前大多數(shù)生化分析儀為開(kāi)放式，封閉式的儀器一般也會(huì)另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道由用戶(hù)自己設(shè)定分析參數(shù)，因此我們有必要了解生化分析儀各個(gè)分析參數(shù)的基本含義以及設(shè)置方法。

1.試驗(yàn)名稱(chēng)常以項(xiàng)目的英文縮寫(xiě)來(lái)設(shè)置，如總蛋白設(shè)置為T(mén)P，白蛋白設(shè)置為ALB等。

2.方法類(lèi)型生化分析儀常用的方法有終點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法、比濁法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測(cè)原理等選擇其中一種分析方法。

3.反應(yīng)溫度自動(dòng)生化分析儀通過(guò)溫度控制系統(tǒng)保持溫度恒定，以保證反應(yīng)的正常進(jìn)行，其保持恒溫的方式有三種：干式恒溫器加熱、水浴式循環(huán)加熱、恒溫器循環(huán)間接加熱。恒溫控制器可以對(duì)25℃、30℃、37℃三種溫度進(jìn)行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇，半自動(dòng)生化分析儀恒溫器屬于這種。全自動(dòng)生化分析儀的溫度控制器一般只能控制37℃一種溫度，少數(shù)也可以控制30℃和37℃兩種溫度。

4.反應(yīng)波長(zhǎng)當(dāng)測(cè)定體系中只有一種組分或混合溶液中待測(cè)組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無(wú)重疊時(shí)，可選用單波長(zhǎng)，如果待測(cè)物質(zhì)有幾個(gè)吸收峰，可選用吸光度最大的一個(gè)波長(zhǎng)，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長(zhǎng)變化較小的某個(gè)波長(zhǎng)。當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時(shí)，測(cè)定過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收，從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，此時(shí)可用雙波長(zhǎng)甚至多波長(zhǎng)測(cè)定，以提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，而在實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長(zhǎng)主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長(zhǎng)范圍內(nèi)有較強(qiáng)的光吸收，常常同測(cè)定波長(zhǎng)有重疊，此時(shí)測(cè)得的吸光度包含待測(cè)物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度，因此必須選用合適的輔助波長(zhǎng)來(lái)消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長(zhǎng)的設(shè)置原則是根據(jù)測(cè)定波長(zhǎng)選擇輔助波長(zhǎng)，要求干擾物質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)同輔助波長(zhǎng)有相同的吸光度。

5.反應(yīng)方向有正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)兩種，反應(yīng)過(guò)程中吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。

6.樣品量與試劑量樣品與試劑量的確定一般按照試劑說(shuō)明書(shū)上的比例，并結(jié)合儀器的特性進(jìn)行設(shè)置，亦可根據(jù)手工法按比例縮減或重新設(shè)計(jì)，但要考慮到檢測(cè)靈敏度、線(xiàn)性范圍，盡可能將樣品稀釋倍數(shù)大些，以降低樣品中其他成分的影響。在樣品與試劑量的設(shè)置過(guò)程中主要應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：①稀釋水量，添加樣品稀釋水的是為了洗出粘附在采樣針內(nèi)壁上的微量血清，減少加樣誤差，添加試劑稀釋水是為了避免試劑間的交叉污染，兩種稀釋水的量應(yīng)在復(fù)溶試劑時(shí)按比例扣除。如果采用液體試劑盒時(shí)因不再用水，無(wú)法扣除稀釋水量，所以?xún)煞N稀釋水應(yīng)盡量減少，以免試劑被過(guò)量稀釋。②最小樣品量，即分析儀進(jìn)樣針能在規(guī)定的誤差范圍內(nèi)吸取的最小樣品量，隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，儀器的最小樣品量逐漸減小，目前有少至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產(chǎn)物或高活性酶濃度的情況下往往需采用分析儀的最小樣品量作為減量參數(shù)，從而使儀器的檢測(cè)范圍上限得以擴(kuò)大。③總反應(yīng)容量，在不同的分析儀有一個(gè)不同的規(guī)定范圍，在設(shè)置的時(shí)候樣品量和試劑量之和不能超過(guò)這一范圍。該值受儀器的光路系統(tǒng)所影響，直射式光路由于光束較寬，難于減少所測(cè)試反應(yīng)液體積，集束式光路則是通過(guò)一個(gè)透鏡使光束變窄，可檢測(cè)低至180μl的反應(yīng)液混合體，近年來(lái)又出現(xiàn)了點(diǎn)光源技術(shù)，它的光束更小，照射到樣品杯時(shí)僅為一個(gè)點(diǎn)，可使反應(yīng)液的量降至120μl.④試劑量/樣品量比值，不要為節(jié)省試劑而過(guò)分地減少試劑用量，因?yàn)樵诮K點(diǎn)比色法中，縮小試劑量/樣品量比值會(huì)降低線(xiàn)性范圍，遇高濃度樣本會(huì)因試劑量不足而使結(jié)果偏低。

7.分析時(shí)間分析時(shí)間包括孵育時(shí)間、延遲時(shí)間、監(jiān)測(cè)時(shí)間等，選擇不同的分析方法應(yīng)選擇相應(yīng)的分析時(shí)間。

8.計(jì)算因子（F值）和實(shí)測(cè)F值用連續(xù)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行酶活性測(cè)定時(shí)，不需作標(biāo)準(zhǔn)管或標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)摩爾吸光系數(shù)很容易進(jìn)行酶活性濃度的計(jì)算。先測(cè)定在線(xiàn)性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的變化（ΔA/min），以U/L代表酶活性濃度時(shí)，則可按下式進(jìn)行計(jì)算：

U/L，t℃=△A/min×F==△A/min×V×106/（ε×V×L）

式中V：反應(yīng)體系總體積（ml）；106：將mol換算成μmol；ε：摩爾吸光系數(shù)（cm2/mol）；v：樣品體積（ml）；L：比色杯光徑（cm）。當(dāng)條件固定時(shí)，從理論上講V、v和L均為固定值，ε值為常數(shù)，所以F值是恒定的。F值對(duì)酶的測(cè)定十分重要，過(guò)高雖然測(cè)定的線(xiàn)性較寬，但重復(fù)性差，反之精密度雖好，但檢測(cè)線(xiàn)性窄，因此應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行合理的設(shè)置和應(yīng)用。但是在臨床實(shí)際工作中，儀器諸多因素如波長(zhǎng)的準(zhǔn)確性、半波寬的大小、比色杯光徑及磨損與清潔度、溫控的準(zhǔn)確性、加樣系統(tǒng)狀況等若不符合要求或發(fā)生變化都會(huì)影響指示物的ε值或上述公式中的相關(guān)項(xiàng)，因此應(yīng)在具體儀器條件下，定期檢查和實(shí)際測(cè)定指示物的實(shí)測(cè)ε值和F值。因?yàn)榧僋AD（P）H溶液不穩(wěn)定，所以NAD（P）H的ε值需用葡萄糖己糖激酶法實(shí)測(cè)，實(shí)際操作為將某一濃度的葡萄糖溶液重復(fù)5-10次測(cè)定，得到相應(yīng)的一組吸光度A值，求出Aˉ±s，注意s必須低于規(guī)定的批內(nèi)允許值，再根據(jù)下面兩個(gè)公式分別計(jì)算出NAD（P）H的實(shí)測(cè)ε值和F值。

9.線(xiàn)性度是非線(xiàn)性比率的界線(xiàn)，常用%表示，其計(jì)算公式為，式中：k1為連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間2/3內(nèi)前讀數(shù)時(shí)間的斜率，k2為后2/3讀數(shù)時(shí)間的斜率，k3為總的斜率，一般設(shè)置為15%.對(duì)一些酶活性項(xiàng)目，可以適當(dāng)放寬，當(dāng)不需要設(shè)置檢查界限時(shí)，設(shè)置其為0.線(xiàn)性百分?jǐn)?shù)大，說(shuō)明Δk之間已不成線(xiàn)性；超過(guò)極限值說(shuō)明底物不足，檢測(cè)結(jié)果會(huì)變低，應(yīng)稀釋后重測(cè)。

10.底物耗盡限額選擇連續(xù)監(jiān)測(cè)法或兩點(diǎn)終點(diǎn)法時(shí)設(shè)置，不同型號(hào)分析儀的設(shè)計(jì)不一樣，有的為零點(diǎn)與監(jiān)測(cè)第一點(diǎn)吸光度的差額，有的為吸光度上升或下降至指定吸光度（MAX-OD/MIN-OD）的數(shù)值。超過(guò)限額說(shuō)明樣品的酶活性非常高，底物消耗太快，在儀器程序規(guī)定的線(xiàn)性反應(yīng)期內(nèi)吸光度的變化往往不代表真正的酶活力，導(dǎo)致結(jié)果偏低，該樣品應(yīng)稀釋一定的倍數(shù)重新測(cè)定。此參數(shù)對(duì)于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要，下面以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶為例簡(jiǎn)述設(shè)置MIN-OD的步驟，選擇一份高活性酶的混合血清，用生理鹽水稀釋?zhuān)玫揭唤M從低濃度至高濃度的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶溶液；把這一組溶液按儀器設(shè)定的程序進(jìn)行測(cè)定，并打印出反應(yīng)曲線(xiàn)；從曲線(xiàn)中可以發(fā)現(xiàn)當(dāng)酶活力達(dá)到一定臨界濃度時(shí)，該臨界濃度的反應(yīng)曲線(xiàn)在連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)成線(xiàn)性，但是在監(jiān)測(cè)時(shí)間后成非線(xiàn)性，即連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間的最后一個(gè)讀數(shù)點(diǎn)正好是線(xiàn)性與非線(xiàn)性的臨界點(diǎn)，所以該點(diǎn)的吸光度是在連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間內(nèi)酶促反應(yīng)沒(méi)有發(fā)生底物耗盡時(shí)所能達(dá)到的最小吸光度值，這個(gè)最小吸光度值也就是MIN-OD.當(dāng)酶活力高于上述臨界濃度時(shí)，反應(yīng)曲線(xiàn)在連續(xù)監(jiān)測(cè)期內(nèi)已不呈線(xiàn)性反應(yīng)，有些儀器自動(dòng)選擇彈性速率功能，能自動(dòng)選擇反應(yīng)曲線(xiàn)上連續(xù)監(jiān)測(cè)期內(nèi)仍呈線(xiàn)性的吸光度數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果，使酶活性測(cè)定的線(xiàn)性范圍得以擴(kuò)大，可以減少稀釋及重測(cè)次數(shù)、降低成本。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

11.試劑吸光度上限、下限試劑吸光度上限為正向反應(yīng)用，可參考試劑盒說(shuō)明書(shū)數(shù)值折算成所用比色杯的光徑。如試劑盒要求上限為0.4，比色杯光徑0.6cm，則試劑吸光度上限設(shè)置為0.24.試劑吸光度下限為負(fù)向反應(yīng)用，設(shè)置法同試劑吸光度上限。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質(zhì)，此時(shí)應(yīng)更換合格試劑。

12.線(xiàn)性范圍試劑盒的線(xiàn)性范圍與試劑質(zhì)量、反應(yīng)時(shí)試劑/樣品比有關(guān)，應(yīng)實(shí)測(cè)試劑盒的線(xiàn)性范圍。當(dāng)樣品濃度低于線(xiàn)性下限應(yīng)增加樣品量重測(cè)，而高于線(xiàn)性上限則應(yīng)稀釋后重測(cè)。使用任何一種方法測(cè)定某待測(cè)物時(shí)，待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍，儀器將顯示測(cè)定結(jié)果超過(guò)線(xiàn)性范圍的提示，多數(shù)分析儀會(huì)自動(dòng)將樣品減量或增量重新測(cè)定。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

13.校正方法儀器內(nèi)的設(shè)置的校正方法一般包含二點(diǎn)校正、多點(diǎn)校正、非線(xiàn)性校正等。二點(diǎn)校正是指用一個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和一個(gè)試劑空白進(jìn)行校正的方法，該法要求反應(yīng)必須符合朗伯-比爾定律，即標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)呈直線(xiàn)。多點(diǎn)校正是多個(gè)具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品用非線(xiàn)性法進(jìn)行校正，適用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)呈各種曲線(xiàn)形式的項(xiàng)目，如多數(shù)的免疫濁度法。非線(xiàn)性校正包括對(duì)數(shù)校正、指數(shù)校正、量程法校正等，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)呈對(duì)數(shù)或指數(shù)曲線(xiàn)特征的項(xiàng)目可選擇所對(duì)應(yīng)的方法校正，量程法則是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上每?jī)牲c(diǎn)間濃度與吸光度的關(guān)系計(jì)算待測(cè)物的濃度。

14.線(xiàn)性回歸方程用于校準(zhǔn)不同分析方法間測(cè)定結(jié)果的一致性，在定標(biāo)后即可求得，有斜率和截距兩個(gè)參數(shù)，a為曲線(xiàn)在縱軸上的截距，b為曲線(xiàn)的斜率。

此外還有項(xiàng)目代碼、小數(shù)點(diǎn)位數(shù)、計(jì)量單位、正常參考值等分析參數(shù)，均可按照實(shí)際情況進(jìn)行設(shè)置。恰當(dāng)設(shè)置各種分析參數(shù)是使用好生化分析儀最重要的部分之一，也是操作者能否正確控制儀器完成一系列復(fù)雜而有序的操作程序的關(guān)鍵，作為新世紀(jì)的檢驗(yàn)工作者，我們有必要掌握這些技術(shù)。