基因工程抗體制備

基因工程抗體制備

由于以往的多克隆抗體和單克隆抗體來自異種動物，所以抗原性很強，不能直接用于人體，否則會引起很強的免疫排斥反應(yīng)。為此在20世紀80年代誕生了應(yīng)用DNA重組及蛋白工程技術(shù)對編碼抗體基因按不同需要進行改造和裝配，經(jīng)導入適當?shù)氖荏w細胞后重新表達的抗體，稱為基因工程抗體。

基因工程抗體具有如下優(yōu)點：①通過基因工程技術(shù)的改造，可以降低甚至消除人體對抗體的排斥反應(yīng)；②基因工程抗體的分子量較小，可以部分降低抗體的鼠源性，更有利于穿透血管壁，進入病灶的核心部位；③根據(jù)治療的需要，制備新型抗體；④可以采用原核細胞、真核細胞和植物等多種表達形式，大量表達抗體分子，大大降低了生產(chǎn)成本。

一、人源化抗體

制備人源化抗體的主要目的是減少抗體的異源性，以利于臨床應(yīng)用。雖然嵌合抗體的免疫原性明顯低于鼠McAb，但由于可變區(qū)仍保留鼠源性，為了進一步降低抗體的免疫原性，近年來在嵌合抗體的基礎(chǔ)上構(gòu)建了改形抗體。

（一）嵌合抗體

從雜交瘤細胞中分離出功能性可變區(qū)基因，與人Ig恒定區(qū)的基因連接，插入適當質(zhì)粒，構(gòu)建鼠-人嵌合的重鏈和輕鏈基因質(zhì)粒載體，共同轉(zhuǎn)染宿主細胞（如骨髓瘤細胞），表達鼠-人嵌合抗體。

（二）改形抗體

改形抗體是指利用基因工程技術(shù)，將人抗體可變區(qū)（V）中互補決定簇（CDR）序列改換成鼠源單抗CDR序列。重構(gòu)成既具有鼠源性單抗的特異性又保持抗體親和力的人源化抗體。

二、小分子抗體

小分子抗體包括抗原結(jié)合片段（Fv）、單鏈可變區(qū)片段（ScFv）和單區(qū)抗體（SdAb）等。此種抗體分子量小，可在大腸桿菌等原核細胞表達，在人體內(nèi)穿透力強，有利于疾病的治療。

三、抗體融合蛋白

抗體融合蛋白是指利用基因工程技術(shù)將抗體片段與其他生物活性蛋白融合所得的產(chǎn)物。由于融合蛋白的不同，這種抗體融合蛋白具有多種生物學功能，并且表達的重組蛋白既不影響單鏈抗體的抗原結(jié)合能力，也不影響與之融合的蛋白質(zhì)的生物學特性。

四、雙特異性抗體

雙特異性抗體（BsAb）又稱雙功能抗體（BFA），它的兩個抗原結(jié)合位點具有不同的特異性，應(yīng)用于結(jié)合兩種不同的抗原分子，在生物醫(yī)學中有著重要的意義。

BsAb的種類有：

1.化學交聯(lián)BsAb

2.細胞工程BsAb

3.基因工程BsAb

五、噬菌體抗體庫技術(shù)

噬菌體抗體庫技術(shù)是近年發(fā)展起來的一項新的基因工程抗體技術(shù)。它是將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體，轉(zhuǎn)染工程細菌進行表達，然后用抗原篩選即可獲得特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術(shù)可以得到完全人源性的抗體，在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其獨特的優(yōu)越性。